本文關(guān)鍵詞：變異鏈球菌ldh基因啟動(dòng)子的克隆及活性檢測(cè)

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【摘要】：目的克隆變異鏈球菌ldh基因啟動(dòng)子,并驗(yàn)證其活性。方法以變異鏈球菌UA159基因組為模版,PCR擴(kuò)增變異鏈球菌ldh基因候選啟動(dòng)子,將其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)報(bào)告基因表達(dá)載體pIB107 BamH I/XhoI之間,構(gòu)建ldh基因啟動(dòng)子gusA報(bào)告載體pCKS11,PCR、酶切及測(cè)序鑒定;經(jīng)ScaI酶線性化后轉(zhuǎn)化變異鏈球菌UA159,卡那霉素篩選陽(yáng)性克隆SCKS11,經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定后,檢測(cè)其GusA活性。結(jié)果成功擴(kuò)增出大小為269bp的ldh基因候選啟動(dòng)子;經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定,變異鏈球菌ldh基因候選啟動(dòng)子gusA報(bào)告基因表達(dá)載體pCKS11構(gòu)建正確;PCR和測(cè)序鑒定,ldh基因候選啟動(dòng)子gusA報(bào)告株SCKS11構(gòu)建成功;變異鏈球菌ldh基因候選啟動(dòng)子啟動(dòng)的GusA活性是無(wú)啟動(dòng)子的陰性對(duì)照的5.8倍,是陽(yáng)性對(duì)照變異鏈球菌clpP基因啟動(dòng)子的0.9倍。結(jié)論成功克隆變異鏈球菌ldh基因啟動(dòng)子序列,具有較強(qiáng)的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄活性,為研究ldh基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院暨福建醫(yī)科大學(xué)廈門市第一教學(xué)醫(yī)院檢驗(yàn)科;福建醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院;廈門市中心血站;
【關(guān)鍵詞】： 變異鏈球菌 ldh基因 啟動(dòng)子
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81000762) 福建省自然科學(xué)基金(No.2015J0155,2013D002)聯(lián)合資助~~
【分類號(hào)】：R780.2
【正文快照】： (1.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Xiamen University,Xiamen361003,China;2.The First Clinical Medical College of Fujian Medical University,Fuzhou350108,China;3.Xiamen Central Blood Service Station,Xiamen361003,China)變異

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本文編號(hào)：996469