本文關(guān)鍵詞：變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株ciaH、clpP基因的表達(dá)差異分析

  更多相關(guān)文章： 變形鏈球菌耐氟菌株 親代菌株 實(shí)時(shí)熒光定量PCR ciaH基因 clpP基因

【摘要】：目的： 齲病是一種細(xì)菌感染性疾病，是一種牙體硬組織的慢性進(jìn)行性破壞，主要表現(xiàn)為無機(jī)物的脫礦及有機(jī)物的分解。齲病的特點(diǎn)是發(fā)病率高、分布廣，，是口腔內(nèi)最常見疾病。變形鏈球菌是齲病的主要致病菌[1][2]，其致齲毒力特征主要包括產(chǎn)酸性、耐酸性、粘附性等。一直以來,防治齲病都是一個(gè)熱點(diǎn)問題，將氟化物用來預(yù)防齲病在預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛認(rèn)可。但是，近年來氟化物被高濃度、高頻率、長時(shí)間的應(yīng)用于局部導(dǎo)致了耐氟菌株的選擇性生長。耐氟菌株的產(chǎn)生為防齲帶來了新的課題，G學(xué)者等[3]發(fā)現(xiàn)當(dāng)氟化物的環(huán)境之下，耐氟菌株比親代野生株的致齲性強(qiáng)。盛江筠等發(fā)現(xiàn)其耐酸性比親代菌株強(qiáng)，而耐氟菌株耐酸性增強(qiáng)的機(jī)制尚未完全清晰，研究已報(bào)道了多條變形鏈球菌的耐酸相關(guān)基因，包括ciaH、clpP基因，本課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)變形鏈球菌耐氟菌株的dgk、ffh、comD等基因發(fā)生突變[4]，都是通過構(gòu)建重組質(zhì)粒、測序的方法來判定基因突變進(jìn)行定性分析。隨著實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的不斷成熟，基因分析的定量化和均相化是未來基因診斷的發(fā)展趨勢，因此，本實(shí)驗(yàn)采用熒光定量PCR技術(shù)，選取處于對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定生長期的耐氟菌株及其親代菌株，對(duì)比其表達(dá)量，來實(shí)現(xiàn)對(duì)ciaH、clpP基因表達(dá)差異的分析。從基因表達(dá)的水平上揭示耐氟菌株及其親代菌株耐酸機(jī)制的改變，解析耐氟菌株耐酸性增強(qiáng)的原因，為研究耐氟菌株的耐酸機(jī)制及基因防齲做了鋪墊。 方法： 1.變形鏈球菌的活化、培養(yǎng)，耐氟菌株的體外誘導(dǎo)，兩種菌株的表型、生理生化及16SrRNA鑒定。 2.變形鏈球菌及其耐氟菌株生長曲線的測定。 3.以16sRNA為內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)ciaH、clpP基因的引物。 4.提取耐氟菌株及其親代菌株對(duì)數(shù)生長期、穩(wěn)定生長期的總RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測定ciaH、clpP基因的表達(dá)量。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建變形鏈球菌耐氟菌株，表型、生理生化及16SrRNA鑒定其仍為變形鏈球菌。 2.繪制變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株的生長曲線；確立24h為對(duì)數(shù)生長期、48h為穩(wěn)定生長期。 3.成功設(shè)計(jì)特異性引物。 4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果分析顯示： （1）變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株ciaH基因在24h、48h時(shí)，表達(dá)差異均為極顯著（P0.01）；且耐氟菌株的表達(dá)量遠(yuǎn)高于親代菌株;耐氟菌株ciaH基因48h較24h明顯增高。 （2）變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株clpP基因24h時(shí)，表達(dá)差異顯著（P0.05）48h時(shí)，表達(dá)差異極顯著（P0.01）；親代菌株48h的表達(dá)量明顯高于24h,耐氟菌株48h的表達(dá)量明顯低于24h;耐氟菌株clpP基因48h較24h明顯降低。 結(jié)論： ciaH、clpP基因的耐氟菌株及其親代菌株表達(dá)差異顯著，這意味著變形鏈球菌耐氟菌株較親代菌株功能發(fā)生改變，這與耐氟菌株耐酸性增強(qiáng)相關(guān)。確定了表達(dá)差異的意義，為研究耐氟菌株的耐酸機(jī)制及ciaH、clpP基因的具體功能提供了一定的理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：變形鏈球菌耐氟菌株 親代菌株 實(shí)時(shí)熒光定量PCR ciaH基因 clpP基因
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 引言13-17
• 1.1 研究現(xiàn)況13-15
• 1.2 研究方法15
• 1.3 研究目的及意義15-17
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.1 菌株17
• 2.2 試劑盒17
• 2.3 主要儀器17-18
• 2.4 主要試劑18-19
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 3.1 變形鏈球菌的活化、培養(yǎng)19
• 3.2 變形鏈球菌耐氟菌株的體外誘導(dǎo)19
• 3.3 變形鏈球菌及其耐氟菌株的表型、生理生化鑒定19-20
• 3.3.1 變形鏈球菌的表型、生理生化鑒定19-20
• 3.3.2 變形鏈球菌耐氟菌株的表型、生理生化鑒定20
• 3.4 變形鏈球菌及其耐氟菌株的 16SrRNA 序列鑒定20-21
• 3.5 變形鏈球菌及其耐氟菌株的生長曲線的測定21
• 3.6 引物設(shè)計(jì)21-22
• 3.7 總 RNA 的抽提、純化和檢測22-23
• 3.7.1 總 RNA 抽提的具體步驟如下：22
• 3.7.2 總 RNA 濃度的檢測22-23
• 3.8 去除基因組 DNA 反應(yīng)23
• 3.9 cDNA 的合成23-24
• 3.10 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR24-25
• 3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-39
• 4.1 變形鏈球菌及其耐氟菌株的表型、生理生化鑒定26
• 4.2 變形鏈球菌及其耐氟菌株的 16SrRNA 序列鑒定26-28
• 4.3 變形鏈球菌及其耐氟菌株的生長曲線28-29
• 4.4 引物設(shè)計(jì)結(jié)果29-30
• 4.5 總 RNA 濃度的檢測30
• 4.6 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 結(jié)果30-36
• 4.6.1 16sRNA 擴(kuò)增曲線30-31
• 4.6.2 ciaH 擴(kuò)增曲線31-32
• 4.6.3 clpP 擴(kuò)增曲線32-33
• 4.6.4 16sRNA 溶解曲線33-34
• 4.6.5 ciaH 溶解曲線34-35
• 4.6.6 clpP 溶解曲線35-36
• 4.7 數(shù)據(jù)分析36-39
• 第5章 討論39-42
• 第6章 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 導(dǎo)師簡介48-49
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果49-50
• 致謝50

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李朋蓮;變形鏈球菌耐氟菌株及其親代菌株ciaH、clpP基因的表達(dá)差異分析[D];吉林大學(xué);2015年

本文編號(hào)：984691