本文關(guān)鍵詞：BMP-2對(duì)人牙周膜細(xì)胞成骨和成牙骨質(zhì)向分化的初步研究

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【摘要】：目的本研究擬通過體外實(shí)驗(yàn)比較不同BMP-2濃度對(duì)人牙周膜細(xì)胞向成牙骨質(zhì)和成骨質(zhì)方向分化差異的影響,來探討B(tài)MP-2影響人牙周膜細(xì)胞分化的機(jī)制。同時(shí),研究BMP-2與細(xì)胞的作用時(shí)間和分化的關(guān)系,以及是否存在最佳刺激時(shí)程。從而為牙周組織再生治療中BMP-2的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法1.hPDLCs的培養(yǎng):采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代hPDLCs,觀察細(xì)胞形態(tài)并繪制生長曲線。2.hPDLCs的鑒定:采用流式細(xì)胞儀分析目標(biāo)細(xì)胞表型;免疫細(xì)胞化學(xué)染色法鑒定細(xì)胞來源。3.hPDLCs增殖能力的研究:采用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的變化。4.hPDLCs成牙骨質(zhì)分化的研究:采用熒光定量PCR檢測BMP-2處理后hPDLCs中CAP mRN表達(dá)水平上的改變;利用Western blot檢測BMP-2處理后hPDLCs中CAP、CP-23蛋白水平的變化。5.hPDLCs成骨分化的研究:采用熒光定量PCR檢測BMP-2處理后hPDLCs中RUNX2和COL-1 mRNA表達(dá)水平上的改變;利用Western blot檢測BMP-2處理后hPDLCs中EGFR和COL-1蛋白水平的變化。結(jié)果1.所培養(yǎng)的hPDLCs具有細(xì)胞干性,增殖能力強(qiáng),生長活性好。2.BMP-2對(duì)hPDLCs增殖能力的影響:流式細(xì)胞周期的結(jié)果顯示,92.31%的細(xì)胞在靜止期和DNA合成前期(G0/G1期)。3.BMP-2對(duì)hPDLCs成牙骨質(zhì)向分化能力的影響:1)熒光定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),20ng/ml BMP-2作用下,CAP mRNA表達(dá)量明顯增高,在第5天達(dá)到峰值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2)Western blot結(jié)果顯示,20 ng/ml和100 ng/ml BMP-2作用下hPDLCs中CAP和CP-23表達(dá)量相對(duì)較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.BMP-2對(duì)hPDLCs成骨向分化能力的影響:1)熒光定量PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn),80ng/ml BMP-2作用下,COL-1 mRNA表達(dá)量明顯增高,在第7天達(dá)到峰值,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);100ng/ml BMP-2作用下,RUNX2 mRNA表達(dá)量明顯增高,隨時(shí)間逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2)Western blot結(jié)果顯示,100ng/ml的BMP-2作用下,EGFR和COL-1表達(dá)量明顯上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論1.BMP-2對(duì)hPDLCs成牙骨質(zhì)和成骨方向分化具有上調(diào)作用。BMP-2在低濃度(20ng/ml)時(shí)促進(jìn)hPDLCs向成牙骨質(zhì)方向分化,BMP-2在較高濃度(100ng/ml)作用下促進(jìn)了成骨方向的分化。2.BMP-2刺激的時(shí)間對(duì)hPDLCs的影響也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),存在最佳刺激時(shí)程。成牙骨質(zhì)分化在第5天達(dá)到峰值,成骨方向分化在第7天達(dá)到峰值。這對(duì)臨床確定BMP-2的療程是有價(jià)值的。
【關(guān)鍵詞】：人牙周膜細(xì)胞 BMP-2 分化
【學(xué)位授予單位】：中山大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R781.4
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 一、前言9-15
• 1.1 研究背景9-10
• 1.2 牙周組織工程10-15
• 二、實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2.1 組織材料來源15
• 2.2 本研究主要試劑、耗材及器械15-18
• 三、實(shí)驗(yàn)方法18-28
• 3.1 hPDLCs的原代培養(yǎng)和鑒定18-20
• 3.2 多向分化能力檢測20-28
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-37
• 4.1 hPDLCs的培養(yǎng)28-29
• 4.2 hPDLCs的鑒定29-31
• 4.3 BMP-2對(duì)細(xì)胞凋亡和周期的影響31-32
• 4.4 BMP-2誘導(dǎo)牙周膜細(xì)胞分化32-37
• 五、討論37-40
• 5.1 牙周膜細(xì)胞（periodontal ligament cells, PDLCs）37-38
• 5.2 BMP-2對(duì)hPDLCs成牙骨質(zhì)分化的影響38
• 5.3 BMP-2對(duì)hPDLCs成骨分化的影響38-40
• 六、結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 成果43-44
• 致謝44

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：978115