發(fā)布時(shí)間：2017-10-05 12:39

  本文關(guān)鍵詞：高糖調(diào)節(jié)牙周相關(guān)細(xì)胞多向分化潛能的初步研究

  更多相關(guān)文章： 牙周膜韌帶細(xì)胞 牙齦成纖維細(xì)胞 成骨分化 成軟骨分化 成脂分化 高糖

【摘要】：目的:通過體外培養(yǎng)獲得人牙周膜韌帶細(xì)胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)和人牙齦成纖維細(xì)胞(Human gingival fibroblasts,HGFs),對(duì)比這兩種牙周相關(guān)細(xì)胞成骨、成軟骨以及成脂向分化潛能的差異,觀察不同葡萄糖濃度對(duì)這兩種細(xì)胞多向分化潛能的影響,探索其作用機(jī)制,從而為組織再生和糖尿病患者的牙周炎治療提供更廣闊的思路。方法:1.經(jīng)志愿者知情同意后,在天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科收集因正畸需要拔除的健康雙尖牙以及獲得拔除埋伏阻生智齒時(shí)的牙齦組織,運(yùn)用酶消化結(jié)合組織塊法培養(yǎng)HPDLCs,運(yùn)用組織塊貼壁法培養(yǎng)HGFs,選擇3-4代的細(xì)胞。2.牙周相關(guān)細(xì)胞多向分化潛能的差異比較。對(duì)HPDLCs和HGFs進(jìn)行成骨、成軟骨、成脂誘導(dǎo)。用茜素紅染色、阿利新藍(lán)染色以及油紅O染色分別檢測(cè)它們的成骨、成軟骨及成脂分化能力。半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HPDLCs和HGFs中相關(guān)標(biāo)志基因骨鈣素(osteocalcin,OCN)、runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、I型膠原蛋白(collagen 1,Col 1)、X型膠原蛋白(collagen 10,Col 10)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ2(peroxisome proliferator-activated receptor gamma 2,PPARγ2)m RNA的表達(dá)。3.檢測(cè)不同濃度的糖(5.5、15、25 mmol/l)對(duì)兩種細(xì)胞成骨分化能力的影響。7天和14天提取RNA,運(yùn)用real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá),28天進(jìn)行茜素紅染色。4.檢測(cè)不同濃度的糖(5.5、15、25 mmol/l)對(duì)兩種細(xì)胞成軟骨分化能力的影響。7天和14天提取RNA,運(yùn)用real-time PCR檢測(cè)成軟骨相關(guān)基因的表達(dá),14天進(jìn)行阿利新藍(lán)染色。5.檢測(cè)不同濃度的糖(5.5、15、25mmol/l)對(duì)兩種細(xì)胞成脂分化能力的影響。7天和14天提取RNA,運(yùn)用real-time PCR檢測(cè)成脂相關(guān)基因的表達(dá),21天進(jìn)行油紅O染色。結(jié)果:1.倒置顯微鏡下觀察HPDLCs培養(yǎng)至第5-9天,可見少量的長梭形細(xì)胞從組織塊周圍爬出,圍繞組織塊周圍呈放射狀排列,傳代后細(xì)胞生長迅速。HGFs培養(yǎng)至3-7天,有單個(gè)細(xì)胞爬出組織塊,傳代后則趨于一致的長梭型,生長迅速。2.成骨誘導(dǎo)兩種細(xì)胞培養(yǎng)至28天時(shí),細(xì)胞周圍均有紅染鈣結(jié)節(jié)形成,HPDLCs形成的鈣結(jié)節(jié)明顯多于HGFs,培養(yǎng)至7天和14天的兩種細(xì)胞中均有OCN、RUNX2、Col 1的表達(dá),HPDLCs表達(dá)量高于HGFs(P0.01)。成軟骨誘導(dǎo)兩種細(xì)胞14天時(shí)阿利新藍(lán)染色均為陽性,但HGFs中Col 10的表達(dá)高于HPDLCs(P0.01)。成脂誘導(dǎo)21天時(shí),兩種細(xì)胞中可見紅色脂肪滴形成,但HPDLCs形成的脂肪顆粒明顯少于HGFs,培養(yǎng)至7天和14天的HGFs中PPARγ2表達(dá)明顯高于HPDLCs(P0.01)。3.隨著糖濃度的升高,成骨向誘導(dǎo)兩種細(xì)胞至28天,兩種細(xì)胞周圍的紅染鈣結(jié)節(jié)數(shù)量越少;培養(yǎng)至7天和14天的兩種細(xì)胞進(jìn)行real-time PCR檢測(cè),OCN、RUNX2和Col 1的表達(dá)隨著糖濃度的升高而降低(P0.01)。4.成軟骨向誘導(dǎo)兩種細(xì)胞至14天,隨著糖濃度的升高,兩種細(xì)胞的阿利新藍(lán)染色陽性減弱;培養(yǎng)至7天和14天的兩種細(xì)胞進(jìn)行real-time PCR檢測(cè),Col 10和聚集蛋白聚糖(aggrecan,AGR)的表達(dá)隨著糖濃度的升高而降低(P0.01)。5.成脂向誘導(dǎo)兩種細(xì)胞至21天,隨著糖濃度的升高,形成的脂肪顆粒越明顯,但HPDLCs形成的脂肪顆粒明顯少于HGFs;培養(yǎng)至7天和14天的兩種細(xì)胞進(jìn)行real-time PCR檢測(cè),PPARγ2的表達(dá)隨著糖濃度的升高而升高。結(jié)論:1.HPDLCs和HGFs均有成骨、成軟骨以及成脂向的分化能力。2.HPDLCs的成骨向能力較HGFs強(qiáng),HGFs的成軟骨向和成脂向能力強(qiáng)于HPDLCs。3.高糖抑制HPDLCs和HGFs的成骨向和成軟骨向分化能力。4.高糖促進(jìn)HPDLCs和HGFs的成脂向分化能力。
【關(guān)鍵詞】：牙周膜韌帶細(xì)胞 牙齦成纖維細(xì)胞 成骨分化 成軟骨分化 成脂分化 高糖
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號(hào)說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、人牙齦成纖維細(xì)胞和人牙周膜韌帶細(xì)胞多向分化潛能的比較15-31
• 1.1 對(duì)象和方法15-22
• 1.1.1 主要設(shè)備與儀器15-16
• 1.1.2 主要試劑16
• 1.1.3 方法16-22
• 1.2 結(jié)果22-28
• 1.2.1 HGFs的原代培養(yǎng)22
• 1.2.2 HPDLCs的原代培養(yǎng)22-23
• 1.2.3 茜素紅染色結(jié)果23
• 1.2.4 阿利新藍(lán)染色結(jié)果23-25
• 1.2.5 油紅O染色結(jié)果25
• 1.2.6 RT-PCR檢測(cè)成骨、成脂、成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)25-28
• 1.3 討論28-29
• 1.4 小結(jié)29-31
• 二、高糖對(duì)牙周相關(guān)細(xì)胞成骨向分化能力的影響31-42
• 2.1 對(duì)象和方法31-34
• 2.1.1 主要設(shè)備與儀器31
• 2.1.2 主要試劑31
• 2.1.3 主要試劑配制31-32
• 2.1.4 方法32-34
• 2.2 結(jié)果34-39
• 2.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成骨誘導(dǎo)下茜素紅染色結(jié)果34-35
• 2.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成骨誘導(dǎo)下real-time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá)35-39
• 2.3 討論39-40
• 2.4 小結(jié)40-42
• 三、高糖對(duì)牙周相關(guān)細(xì)胞成軟骨向分化能力的影響42-51
• 3.1 對(duì)象和方法42-45
• 3.1.1 主要設(shè)備與儀器42
• 3.1.2 主要試劑42
• 3.1.3 主要試劑配制42-43
• 3.1.4 方法43-45
• 3.2 結(jié)果45-49
• 3.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成軟骨誘導(dǎo)下阿利新藍(lán)染色結(jié)果45-46
• 3.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成軟骨誘導(dǎo)下real-time PCR檢測(cè)成軟骨相關(guān)基因的表達(dá)46-49
• 3.3 討論49-50
• 3.4 小結(jié)50-51
• 四、高糖對(duì)牙周相關(guān)細(xì)胞成脂向分化能力的影響51-58
• 4.1 對(duì)象和方法51-53
• 4.1.1 主要設(shè)備與儀器51
• 4.1.2 主要試劑51-52
• 4.1.3 主要試劑配制52
• 4.1.4 方法52-53
• 4.2 結(jié)果53-56
• 4.2.1 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成脂誘導(dǎo)下油紅O染色結(jié)果53-55
• 4.2.2 HPDLCs和HGFs在不同糖濃度成軟骨誘導(dǎo)下real-time PCR檢測(cè)成脂相關(guān)基因的表達(dá)55-56
• 4.3 討論56-57
• 4.4 小結(jié)57-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況64-65
• 綜述 IL-6 在2型糖尿病和牙周炎中的作用65-73
• 綜述參考文獻(xiàn)70-73
• 致謝73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：976863