本文關(guān)鍵詞：LOXL2在壓應(yīng)力介導(dǎo)的大鼠髁突軟骨基質(zhì)降解過(guò)程中的作用

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【摘要】：[目的]研究賴(lài)氨酰氧化酶樣蛋白2在壓應(yīng)力刺激下的大鼠髁突軟骨基質(zhì)降解過(guò)程中的作用,并觀察該蛋白對(duì)髁突軟骨中炎癥反應(yīng)的影響,為臨床上治療顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎樣病變提供新的治療方向。[方法]選擇88只7周齡雄性SD大鼠,應(yīng)用本課題組自主設(shè)計(jì)的顳下頜關(guān)節(jié)壓應(yīng)力加載動(dòng)物模型裝置,對(duì)加力組大鼠雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)施加向向后上的壓應(yīng)力刺激(80g/側(cè)),誘導(dǎo)大鼠髁突軟骨發(fā)生病理性變化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)周期,將大鼠隨機(jī)分為4天和7天組,采用自身對(duì)照的方法,在大鼠一側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)注射藥物(0.44ug重組LOXL2蛋白或2μg LOXL2中和抗體),對(duì)側(cè)對(duì)照藥物(PBS或?qū)φ罩泻涂贵w),根據(jù)處理的方法不同每組分為四個(gè)亞組：空白對(duì)照組,單純加藥組,單純加力組和加力加藥組。采用蘇木素-伊紅(HE)染色觀察大鼠髁突軟骨層厚度及形態(tài)學(xué)的變化；阿辛藍(lán)染色觀察軟骨細(xì)胞外蛋白聚糖含量的變化；免疫組化(immunohistochemistry, IHC)染色檢測(cè)LOXL2、Ⅱ型膠原、炎癥相關(guān)因子TNFα在蛋白水平的表達(dá)改變；采用RT-PCR檢測(cè)LOXL2、COL-Ⅱ、COL-X、TNFα、 IL-1在mRNA水平的表達(dá)改變。[結(jié)果]1.免疫組化結(jié)果顯示,在壓應(yīng)力作用4天時(shí),大鼠髁突軟骨中的LOXL2表達(dá)略有下降,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),而在壓應(yīng)力作用7天時(shí),大鼠髁突軟骨細(xì)胞中LOXL2的表達(dá)發(fā)生了明顯的降低(p0.05)。與免疫組化結(jié)果類(lèi)似的是,qRT-PCR結(jié)果也顯示,在加力4天,LOXL2的mRNA表達(dá)水平下降了18%(p0.05),7天時(shí),LOXL2的mRNA表達(dá)水平下降了47%(p0.05)2.免疫組化結(jié)果顯示,在非加力組中,注射rhLOXL2后大鼠髁突軟骨細(xì)胞中的LOXL2表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(p0.05)。而加力4天時(shí),與單純加力組相比,注射rhLOXL2后LOXL2的表達(dá)量輕度上升；當(dāng)加力達(dá)到7天時(shí),與單純加力組相比,注射rhLOXL2后LOXL2表達(dá)明顯升高。這一結(jié)果與qRT-PCR結(jié)果基本一致,在加力7天時(shí),加力加藥組相比于單純加力組髁突軟骨中的LOXL2表達(dá)量升高了34%(p0.05),而4天時(shí)LOXL2表達(dá)僅升高13%(p0.05)。相反,在加力7天后,注射LOXL2中和抗體可降低大鼠髁突軟骨內(nèi)的LOXL2表達(dá)水平。3.增加LOXL2的表達(dá)能使壓應(yīng)力刺激下大鼠髁突軟骨變薄得到部分恢復(fù),加力4天時(shí),相對(duì)于單純加力組,髁突軟骨總厚度恢復(fù)了10%；加力7天時(shí),相對(duì)于單純加力組,加力加藥組恢復(fù)了68%。相反,在加力7天后,降低LOXL2的表達(dá)可使大鼠髁突軟骨的厚度進(jìn)一步減少25%。4.增加LOXL2的表達(dá)后,相比于單純加力組,4天組細(xì)胞外蛋白聚糖含量有增加了15%(p0.05),而7天組增加了108%(p0.05)。此外,免疫組化結(jié)果表明增加LOXL2的表達(dá)可以促進(jìn)加力后髁突軟骨細(xì)胞外Ⅱ型膠原的表達(dá)上升。qRT-PCR結(jié)果與上述結(jié)果類(lèi)似,加力4天時(shí),Ⅱ型膠原的含量在rhLOXL2的作用下較單純加力組增加了27%,而加力7天時(shí),其表達(dá)量與單純加力組相比增加了將近109%,X型膠原表達(dá)量的改變與Ⅱ型膠原類(lèi)似。相反,加力7天后,降低LOXL2的表達(dá)水平可加重細(xì)胞外基質(zhì)的降解,使得軟骨細(xì)胞外蛋白聚糖和Ⅱ型膠原含量降低。5.TNFα免疫組化結(jié)果顯示,4天組和7天組髁突軟骨細(xì)胞中的TNFα表達(dá)均明顯升高,并且增加LOXL2的表達(dá)后TNFα的表達(dá)水平明顯降低,接近正常值。qRT-PCR結(jié)果也顯示,與對(duì)照組相比,TNFα的mRNA表達(dá)量在壓應(yīng)力刺激4天后上調(diào)了40%,而在加入rhLOXL2后與單純加力組相比下降了36%,而在加力7天后上調(diào)50%,加藥后比單純加力組又下降了47%。IL-1的表達(dá)改變與TNFa類(lèi)似。[結(jié)論]1.壓應(yīng)力刺激髁突軟骨導(dǎo)致LOXL2在4天輕度降低,而在7天明顯下降,因此LOXL2可能在壓應(yīng)力刺激下大鼠髁突軟骨的基質(zhì)降解中起著重要的作用。2.應(yīng)用重組LOXL2蛋白可以升高加力后大鼠髁突軟骨LOXL2的表達(dá)水平,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(蛋白聚糖及膠原蛋白)的恢復(fù),從而緩解髁突軟骨的病理性變薄,這一效應(yīng)具有時(shí)間依賴(lài)性。3.應(yīng)用重組LOXL2蛋白可以減少壓應(yīng)力刺激下髁突軟骨炎癥因子的表達(dá),緩解大鼠髁突軟骨的炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)可能會(huì)引起基質(zhì)降解,并且早于基質(zhì)的降解作用。
【關(guān)鍵詞】：賴(lài)氨酰氧化酶樣蛋白2 髁突軟骨 骨關(guān)節(jié)炎 軟骨細(xì)胞 細(xì)胞外基質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R782
【目錄】：

• 前言5-7
• 摘要7-10
• abstract10-14
• 英文縮略詞表14-15
• 第一章 緒論15-26
• 參考文獻(xiàn)21-26
• 第二章 實(shí)驗(yàn)研究26-68
• 2.1 引言26-27
• 2.2 材料與方法27-39
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-60
• 2.4 討論60-63
• 2.5 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 第三章 全文總結(jié)68-70
• 致謝70-71
• 附錄一. 研究生在讀期間發(fā)表論文71-72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 顧延，戴\戎，裘世靜，戴閩;異常高應(yīng)力導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨退變機(jī)理的形態(tài)學(xué)研究[J];中華外科雜志;1995年10期

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本文編號(hào)：960992