本文關(guān)鍵詞：miR-17～92家族介導(dǎo)的HDAC9對炎癥牙周膜干細(xì)胞成骨分化能力的影響

  更多相關(guān)文章： 牙周膜干細(xì)胞 PDLSCs表觀遺傳學(xué) 組蛋白去乙酰化酶 microRNA

【摘要】：【研究背景】牙周病是發(fā)病率最高的口腔疾病之一,會導(dǎo)致牙齦出血,牙槽骨吸收,牙周袋形成,牙齒松動脫落。牙周潔治和牙周刮治等傳統(tǒng)牙周病治療方法只能延緩牙槽骨的吸收和疾病的進(jìn)展,無法從根本上改善牙槽骨吸收,并重建已吸收的牙槽骨。而牙周組織再生術(shù)通過植入骨或者骨的替代物和膜性材料誘導(dǎo)骨的生成。20世紀(jì)70年代末到80年代初,以Nyman為代表的一些學(xué)者經(jīng)過一系列研究發(fā)現(xiàn)在牙周組織再生術(shù)后的牙周組織修復(fù)愈合過程中,只有牙周膜組織具有組織再生能力。2004年Byoung-Moo Seo等從牙周膜組織中分離出了具有多向分化潛能的干細(xì)胞——牙周膜干細(xì)胞(Periodontal Ligament Stem Cells,PDLSCs)。牙周膜干細(xì)胞成為最有潛力成為牙周組織重建的種子細(xì)胞。干細(xì)胞治療方法的興起為牙槽骨的重建帶來了新的希望。在炎癥狀況下細(xì)胞內(nèi)的基因序列并未發(fā)生變化,但是基因的表達(dá)卻與正常細(xì)胞有所不同,這種現(xiàn)象與細(xì)胞的表觀遺傳修飾的改變有著緊密聯(lián)系。表觀遺傳修飾是對染色體的共價修飾,不引起堿基序列的變化,但是可以導(dǎo)致穩(wěn)定的可遺傳的表型改變[1,2]。組蛋白乙�；潜碛^遺傳學(xué)的一種修飾方式,組蛋白去乙�；�(HDACs)移除組蛋白賴氨酸位點的乙�；鶊F(tuán)后使組蛋白與DNA結(jié)合變得緊密,阻礙了DNA啟動子區(qū)域與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合,因此抑制了基因的轉(zhuǎn)錄。micro RNA(mi RNA)是一類長度在19~25nt的非編碼的內(nèi)源性小分子RNA,它能夠靶向與m RNA互補配對,通過抑制靶m RNA的翻譯或直接降解靶m RNA,從而負(fù)向調(diào)控靶基因的表達(dá)和功能。有文獻(xiàn)報道,HDAC抑制劑作用于人類乳房和肺腫瘤細(xì)胞激發(fā)了由mi R-15和let-7介導(dǎo)的凋亡機(jī)制[3]。這說明了HDACs對mi RNA也有調(diào)控作用。劉亞麗等已經(jīng)證明在炎癥微環(huán)境下,PDLSCs中TNF-α、mi R-17以及mi R-17的靶基因Smurf1可以形成一個協(xié)同的反饋調(diào)節(jié),從而調(diào)控炎癥牙周膜干細(xì)胞(Inflammatory PDLSCs,i-PDLSCs)向成骨方向分化[4]。本研究中我們從表觀遺傳的角度出發(fā),研究HDAC酶對牙周膜干細(xì)胞的成骨分化能力的影響并進(jìn)一步探討二者之間的影響是否由mi R-17~92家族介導(dǎo)�！狙芯磕康摹勘狙芯繌谋碛^遺傳學(xué)的角度入手,首先研究HDAC酶對i-PDLSCs成骨分化的影響,以及進(jìn)一步探究HDAC酶對i-PDLSCs成骨分化的影響是否由mi R-17~92家族介導(dǎo)�！狙芯糠椒ā�1.q RT-PCR和Western Blotting檢測i-PDLSCs與h-PDLSCs中HDAC酶的表達(dá)差異。2.轉(zhuǎn)染HDAC9 si RNA后,q RT-PCR,Western Blotting和茜素紅染色鑒定i-PDLSCs成骨分化能力。3.轉(zhuǎn)染mi R-20a mimics和inhinitors后,q RT-PCR、Western Blotting和茜素紅染色鑒定i-PDLSCs的成骨分化能力。4.轉(zhuǎn)染HDAC9 si RNA后,Taqman PCR檢測pri-mi R-17~92的表達(dá)變化,q RT-PCR檢測mi R-17~92家族成熟體的表達(dá)變化,Western Blotting觀察細(xì)胞內(nèi)H3K14和H4K16的乙�；�。【實驗結(jié)果】1.PCR檢測結(jié)果顯示,i-PDLSCs中HDAC9的表達(dá)較h-PDLSCs升高,其他HDAC酶變化差異沒有顯著性,Western Blotting檢測HDAC9表達(dá)的結(jié)果與q RT-PCR結(jié)果一致。2.轉(zhuǎn)染si RNA沉默HDAC9的表達(dá)后,q RT-PCR,Western Blotting和茜素紅染色的結(jié)果均顯示i-PDLSCs成骨分化能力上調(diào)。3.i-PDLSCs中轉(zhuǎn)染mi R-20a mimics后,細(xì)胞成骨分化能力升高;轉(zhuǎn)染mi R-20a inhinitors后,細(xì)胞成骨分化能力降低。4.轉(zhuǎn)染si RNA沉默HDAC9的表達(dá)后,i-PDLSCs中pri-mi R-17~92表達(dá)升高,mi R-17~92家族成熟體mi R-17,19,20a,92a表達(dá)升高,而mi R-18a表達(dá)未見明顯變化,細(xì)胞內(nèi)H3K14和H4K16乙�；缴��！窘Y(jié)論】炎癥牙周膜干細(xì)胞中HDAC9的表達(dá)較健康牙周膜干細(xì)胞升高,引起細(xì)胞內(nèi)H3K14和H4K16的乙�；浇档�,使mi R-17~92家族的表達(dá)受到抑制,可能導(dǎo)致了炎癥牙周膜干細(xì)胞的成骨分化能力降低。
【關(guān)鍵詞】：牙周膜干細(xì)胞 PDLSCs表觀遺傳學(xué) 組蛋白去乙�；� microRNA
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-25
• 實驗一 牙周膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與生物學(xué)特性鑒定25-36
• 1 材料25-26
• 2 方法26-31
• 3 結(jié)果31-34
• 4 討論34-36
• 實驗二 炎癥牙周膜干細(xì)胞與健康牙周膜干細(xì)胞中HDAC酶表達(dá)的差異36-44
• 1 材料36
• 2 方法36-40
• 3 結(jié)果40-42
• 4 討論42-44
• 實驗三 HDAC9對炎癥牙周膜干細(xì)胞成骨分化能力的影響44-49
• 1 材料44
• 2 方法44-45
• 3 結(jié)果45-47
• 4 討論47-49
• 實驗四 miR-17~92家族中miR-20a對炎癥牙周膜干細(xì)胞成骨分化能力的影響49-56
• 1 材料49
• 2 方法49-51
• 3 結(jié)果51-53
• 4 討論53-56
• 實驗五 HDAC9對miR-17~92家族表達(dá)的影響56-63
• 1 材料56
• 2 方法56-58
• 3 結(jié)果58-60
• 4 討論60-63
• 小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 個人簡歷和研究成果70-71
• 致謝71

，

本文編號：954086