本文關(guān)鍵詞：糞腸球菌感染根管形成根尖生物膜及根管預(yù)備對其影響的體外研究

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【摘要】：在口腔細(xì)菌學(xué)研究發(fā)展愈加前沿以來,國內(nèi)外大量學(xué)者研究表明根尖周炎的發(fā)病來源中最重要的是細(xì)菌的影響。而細(xì)菌生物膜由依靠胞外產(chǎn)物(如多糖及蛋白質(zhì))而粘附于固體表面的細(xì)菌群落組成。細(xì)菌生物膜能夠通過結(jié)合有機(jī)和無機(jī)成分,形成穩(wěn)定的生物群落從而產(chǎn)生相互影響及作用。因此,從細(xì)菌學(xué)的角度看,生物膜為細(xì)菌提供了一個穩(wěn)定的生存環(huán)境,起到了屏障作用以及占位性保護(hù)作用,從而使細(xì)菌不那么容易被破壞,以此顯著提高細(xì)菌的生存能力及外界抵抗力[3,�，F(xiàn)階段,關(guān)于牙體牙髓疾病和牙周病中的細(xì)菌生物膜的實驗,大多數(shù)為根管里面的生物膜以及牙頸部和牙齒表面的菌斑生物膜。但是由于根尖及牙周的組織和細(xì)菌難以取材,因此對于感染根管形成根尖周炎和根尖生物膜的原因尚未完全明了。Plakunov研究發(fā)現(xiàn)：當(dāng)有外界刺激干擾感染根管時,穩(wěn)定的細(xì)菌生物膜會釋放出游離的細(xì)菌,從而導(dǎo)致再次感染甚至在其他部位繁殖形成新的。在牙體牙髓疾病致病菌中,糞腸球菌(E.faecalis)的檢出率在治療前與治療后有著明顯差異,特別是在根尖周疾病中,許多研究證明糞腸球菌是難治性根尖周炎的優(yōu)勢菌。本課題小組的前期研究顯示,對于暴露在空氣中所形成的感染根管,根管下段以下的預(yù)備對根尖生物膜的形成有促進(jìn)作用。本實驗利用前期實驗完成的體外模型形成糞腸球菌感染根管,在不考慮機(jī)體免疫機(jī)制的條件下,研究根管預(yù)備對糞腸球菌感染根管形成根尖周炎的影響,為臨床預(yù)防根尖生物膜的形成提供參考。目的感染根管內(nèi)糞腸球菌的體外模型的建立,探討根管預(yù)備對根尖細(xì)菌滲漏的體外細(xì)菌生物膜的形成條件的影響。材料和方法1.離體牙揀選：正畸患者的健康前磨牙選擇：二十。模型制作：將離體牙各自密封于盛有BHI瓊脂培養(yǎng)基的無菌小瓶內(nèi),使其根尖四毫米浸沒于培養(yǎng)基中。隨機(jī)抽取10個作為實驗組進(jìn)行開髓,之后將糞腸球菌接種于髓腔。于建模后21d將標(biāo)本戊二醛固定后酒精梯度脫水,石蠟包埋后,分別對牙頸部、根中1/3及根尖1/3進(jìn)行組織切片,厚度為7μm。切片經(jīng)Brown and Brenn染色法(改良革蘭氏染色法)染色后,置于光學(xué)顯微鏡下從低到高的倍數(shù)進(jìn)行觀察,記錄觀察結(jié)果并保存圖片。2.離體牙選擇：因正畸情況而拔除的健康雙尖牙三百二十顆。模型制作：將離體牙各自密封于盛有BHI瓊脂培養(yǎng)基的無菌小瓶內(nèi),使其根尖四毫米浸沒于培養(yǎng)基中。建模后將其隨機(jī)分為對照組A(n=70)、實驗組(n=250)。實驗組做開髓處理后接種糞腸球菌,對照組不做任何處理。全部置于三氣培養(yǎng)箱中(含5% O2.85%N2.10% CO2;溫度37℃)。在做干擾前先將320個模型放置21d,并于1d及21d分別利用16SrRNA通用引物PCR法檢測根尖周細(xì)菌。確保體外模型未被細(xì)菌感染后隨機(jī)將實驗組分為組B、C、D、E。B組為開髓組,C組為根管上2/3干擾組,D組為全長干擾組,E組為超長干擾組。5組分別于干擾后1d,7d,21d,35d,49d,63d進(jìn)行PCR檢測(期間每兩天用滅菌針管通過開髓孔滴入新鮮滅菌BHI液態(tài)培養(yǎng)基)。根據(jù)結(jié)果利用SEM進(jìn)行Ef根尖生物膜觀察并對根尖周細(xì)菌進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。結(jié)果1.建立模型后二十一天利用16SrDNA通用引物PCR檢測根管內(nèi)及根尖周細(xì)菌,對照組根管內(nèi)及根尖周均未檢測到細(xì)菌；實驗組根管內(nèi)檢測到糞腸球菌,并且組織切片Brown Brenn染色可見糞腸球菌感染根管樣本的牙本質(zhì)小管中有深淺、長短不一的染色,證明牙本質(zhì)小管中有糞腸球菌定植。說明糞腸球菌感染根管的體外模型建模成功。2.確定建模成功后,分別對5組于干擾Id,7d,21d,35d,49d,63d進(jìn)行糞腸球菌16SrRNA的PCR檢測。其中A、B、C組始終未檢測到糞腸球菌；組D于7d檢測到；組E于1d檢測到。SEM下可以觀察到D組及E組的根尖周糞腸球菌生物膜。結(jié)論1.糞腸球菌感染根管體外模型,經(jīng)組織學(xué)切片后Brown Brenn染色。結(jié)果證實在糞腸球菌接種于髓腔中21天后,可形成糞腸球菌感染根管。2.本離體實驗顯示,根管預(yù)備與根尖周生物膜的產(chǎn)生為正相關(guān)非必要關(guān)系。對于糞腸球菌感染根管,在根管及根管下段未受干擾的情況下,細(xì)菌不會輕易穿出根尖孔,當(dāng)根管下段受到干擾后,細(xì)菌會穿出根尖孔并形成根尖生物膜。
【關(guān)鍵詞】：體外模型 根尖周炎 糞腸球菌 根尖生物膜
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781.05
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-16
• 第一部分 建立糞腸球菌感染根管體外模型16-23
• 1 材料16-18
• 2 方法18-19
• 3 結(jié)果19-22
• 4 討論22-23
• 第二部分 糞腸球菌經(jīng)根管形成根尖生物膜以及根管預(yù)備對其的影響的體外研究23-30
• 1 材料23-24
• 2 方法24-25
• 3 結(jié)果25-28
• 4 討論28-30
• 全文總結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 文獻(xiàn)綜述35-43
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 致謝43-44
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文及參與科研情況44

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本文編號：922268