本文關(guān)鍵詞：殼聚糖材料對大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化影響的初步探究

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【摘要】：目的：口腔頜面部的外傷、腫瘤和炎癥等均可能導(dǎo)致面神經(jīng)受損,且其自我修復(fù)能力較差,因此探討如何簡單有效地修復(fù)損傷的面神經(jīng)是如今口腔頜面外科乃至顯微整形外科的熱點(diǎn)問題。組織工程技術(shù)的出現(xiàn),為面神經(jīng)以及其他外周神經(jīng)的修復(fù)帶來了新的思路。組織工程即聯(lián)合生物材料和細(xì)胞療法針對神經(jīng)變性疾病開發(fā)了新的治療策略。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)有分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞的相應(yīng)屬性。殼聚糖材料具有良好的的生物相容性和降解性,且降解產(chǎn)物對人體無明顯已知的毒副作用,無免疫原性等特殊生物醫(yī)學(xué)特性,還具有促進(jìn)組織修復(fù)及止血等生物活性,并且它來源廣泛,因此它是一種具有廣泛前景的神經(jīng)組織工程材料。本實驗通過探究大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在誘導(dǎo)成神經(jīng)的過程中,殼聚糖材料對腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)表達(dá)的影響,以進(jìn)一步探討殼聚糖材料對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)分化的影響。方法：CCK-8法測得獲取的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖,并應(yīng)用免疫組化進(jìn)行鑒定。采用神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基即加入添加了20ng/mLbFGF和 20ng/mLEGF以及2%B27的Neurobas al培養(yǎng)基,誘導(dǎo)ADSCs成神經(jīng)細(xì)胞,誘導(dǎo)所得細(xì)胞通過形態(tài)學(xué)及免疫熒光進(jìn)行鑒定。CCK-8法測得殼聚糖材料對ADSCs細(xì)胞活力的影響。通過實時熒光定量PCR來比較無殼聚糖膜聯(lián)合培養(yǎng)組和殼聚糖膜聯(lián)合培養(yǎng)組誘導(dǎo)成神經(jīng)過程中BDNF表達(dá)的差異。結(jié)果：原代培養(yǎng)所得細(xì)胞的形狀為細(xì)長梭狀,胞核位于中央,貼壁生長,在外形上與BMSCs難以區(qū)別；免疫組化檢測相關(guān)抗原CD90、CD105為陽性和造血干細(xì)胞相關(guān)抗原CD45為陰性,具有多向分化能力如：成脂、成軟骨；并通過增殖曲線看出ADSCs生長活躍,增殖能力強(qiáng),由于組織來源為脂肪故可確定培養(yǎng)所得細(xì)胞為ADSCs。通過神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)9天所得神經(jīng)球免疫熒光染色nestin陽性,神經(jīng)球吹散進(jìn)一步誘導(dǎo)分化所得細(xì)胞免疫熒光染色MAP-2陽性,結(jié)合形態(tài)學(xué)可基本確定ADSCs已成功誘導(dǎo)分化成神經(jīng)細(xì)胞。CCK-8的結(jié)果表明殼聚糖材料應(yīng)用與否對ADSCs的增殖沒有明顯影響,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。實時熒光定量PCR中SYBRGreen I法分析了在ADSCs成神經(jīng)誘導(dǎo)分化過程中應(yīng)用殼聚糖膜與否對于腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的表達(dá)變化的影響,ADSCs的神經(jīng)分化潛能用BDNF的量變進(jìn)行了評價。實時熒光定量PCR測得對照組(未應(yīng)用殼聚糖膜)在誘導(dǎo)成功后的BDNFmRNA表達(dá)值為1.16556,實驗組(應(yīng)用殼聚糖膜)在誘導(dǎo)成功后的BDNFmRNA表達(dá)值為2.66166。且對照組和實驗組之間BDNF mRNA表達(dá)值差異較明顯,實驗組表達(dá)值高于對照組,為對照組的2.28倍(P0.05)。結(jié)論：ADSCs生長活躍,表現(xiàn)出穩(wěn)定的增長及增殖動力,并可定向誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞以及神經(jīng)細(xì)胞,實驗就分化后的細(xì)胞在形態(tài)、表型層面進(jìn)行了分析,可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞分化成神經(jīng)細(xì)胞后表現(xiàn)出了顯著變化；殼聚糖生物材料的應(yīng)用影響ADSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)細(xì)胞過程中BDNF因子的表達(dá)變化,進(jìn)一步說明殼聚糖生物材料有利于ADSCs誘導(dǎo)分化成神經(jīng)細(xì)胞,并且由于它具有較高的親和性,故可以成為治療神經(jīng)系統(tǒng)損傷體內(nèi)修復(fù)的理想材料。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 神經(jīng)細(xì)胞 殼聚糖材料 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.1
【目錄】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-10
• 前言10-12
• 第一章 脂肪干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定12-30
• 引言12
• 材料與方法12-20
• 結(jié)果分析20-27
• 討論27-30
• 第二章 脂肪干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞方向的誘導(dǎo)分化30-39
• 引言30
• 材料與方法30-33
• 結(jié)果33-37
• 討論37-39
• 第三章 殼聚糖膜的制作及其與ADSCs的相容性研究39-47
• 引言39-40
• 材料與方法40-42
• 結(jié)果42-44
• 討論44-47
• 第四章 成神經(jīng)誘導(dǎo)分化過程中ADSCs與殼聚糖膜共培養(yǎng)后腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的變化47-57
• 引言47
• 材料與方法47-52
• 結(jié)果52-54
• 討論54-57
• 全文結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 中英文對照表62-63
• 致謝63-64
• 脂肪干細(xì)胞的研究進(jìn)展及前景(綜述)64-78
• 參考文獻(xiàn)72-78

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本文編號：921601