本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合血管內(nèi)皮祖細(xì)胞修復(fù)骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的研究

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【摘要】：研究背景:目前,由于口腔頜面部腫瘤或外傷引起的口腔內(nèi)牙槽骨缺損一直是口腔醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn),因此備受關(guān)注。傷口大小影響骨缺損的修復(fù)效果,如果缺損范圍超過成骨組織的愈合能力,那么缺損主要由纖維結(jié)締組織修復(fù)。目前主要有自體以及異體骨移植來修復(fù)缺損,但因術(shù)后并發(fā)癥等問題有一定的局限性。因組織工程技術(shù)的不斷發(fā)展,為骨缺損修復(fù)提供了新的方法和思路。該實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMSCs)與血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)復(fù)合細(xì)胞膜片來修復(fù)牙槽骨缺損,通過構(gòu)建BMMSCs/EPCs膜片,采用Micro-CT掃描等檢測技術(shù),為提高牙槽骨缺損修復(fù)效果奠定理論基礎(chǔ),并創(chuàng)建骨組織缺損修復(fù)的新思路。研究目的:評價(jià)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)聯(lián)合血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)構(gòu)建的復(fù)合膜片修復(fù)骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的能力,研究修復(fù)牙槽骨缺損的新方法。研究內(nèi)容:(1)經(jīng)密度梯度離心法結(jié)合貼壁法獲得的BMMSCs與EPCs經(jīng)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)以及流式細(xì)胞儀檢測BMMSCs與EPCs表面分子表達(dá)情況,并對BMMSCs進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo),檢測其多項(xiàng)分化能力。(2)將BMMSCs與EPCs直接共培養(yǎng),經(jīng)成膜誘導(dǎo)液誘導(dǎo)約10天成膜,對膜片進(jìn)行固定后切片,進(jìn)行HE、ALP染色,對細(xì)胞膜片行組織學(xué)觀察。(3)制備骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損模型,將細(xì)胞膜片植入或不植入作為對照,并對標(biāo)本進(jìn)行Micro-CT掃描以及BV/TV檢測,觀察牙槽骨缺損處成骨情況。研究方法:本實(shí)驗(yàn)以卵巢摘除大鼠(OVX大鼠)作為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型。將體外培養(yǎng)擴(kuò)增的BMMSCs與EPCs、EPCs以及BMMSCs分別按照比例滴加至六孔板上,用α-MEM培養(yǎng)液培養(yǎng),24小時(shí)后換用成膜誘導(dǎo)液培養(yǎng),10天后形成細(xì)胞膜片。制備骨質(zhì)疏松大鼠上頜牙槽骨缺損,將制備好的BMMSCs/EPCs膜片、BMMSCs膜片與EPCs膜片植入骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損處,或不植入作為空白對照。術(shù)后2周、4周、8周分別取材,通過Micro-CT掃描分析等方法,評價(jià)細(xì)胞膜片在牙槽骨缺損處的修復(fù)效果。研究結(jié)果:將細(xì)胞誘導(dǎo)10天后可得細(xì)胞膜片,BMMSCs/EPCs膜片鈣化結(jié)節(jié)表達(dá)情況高于單一BMMSCs膜片以及EPCs膜片。在植入BMMSCs/EPCs膜片8周后,牙槽骨缺損基本修復(fù)完成。BMMSCs膜片組、EPCs膜片組以及空白對照組牙槽骨缺損未完全修復(fù),仍有不同程度的缺損。BMMSCs/EPCs膜片組修復(fù)效果優(yōu)于單一BMMSCs膜片以及EPCs膜片。結(jié)論:BMMSCs/EPCs復(fù)合膜片相對于單一的BMMSCs膜片以及單一的EPCs膜片具有更強(qiáng)的成骨活性以及骨修復(fù)能力。
【關(guān)鍵詞】：干細(xì)胞 組織工程 細(xì)胞膜片 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 血管化 成骨誘導(dǎo) 成膜誘導(dǎo) 直接共培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R782
【目錄】：

• 縮略語表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-24
• 一、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞14-16
• 二、骨質(zhì)疏松大鼠16-18
• 三、血管內(nèi)皮祖細(xì)胞18-20
• 四、細(xì)胞膜片技術(shù)20-22
• 五、骨缺損修復(fù)22-24
• 第一部分 骨質(zhì)疏松大鼠模型建立及BMMSCs與EPCs的分離培養(yǎng)與鑒定24-32
• 1 材料24-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)材料24
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器24-25
• 2 方法25-27
• 2.1 骨質(zhì)疏松大鼠模型的建立25
• 2.2 BMMSCs與EPCs的分離培養(yǎng)25-26
• 2.3 BMMSCs與EPCs的鑒定26
• 2.3.1 BMMSCs表面抗原流式細(xì)胞儀檢測26
• 2.3.2 EPCs表面抗原流式細(xì)胞儀檢測26
• 2.4 BMMSCs多向分化能力檢測26-27
• 2.4.1 BMMSCs成骨分化能力的鑒定26
• 2.4.2 BMMSCs成脂分化能力的鑒定26-27
• 3 結(jié)果27-30
• 3.1 骨質(zhì)疏松癥大鼠模型的建立檢測27-28
• 3.2 BMMSCs以及EPCs形態(tài)觀察28
• 3.3 BMMSCs表面抗原流式細(xì)胞儀檢測28-29
• 3.4 EPCs表面抗原流式細(xì)胞儀檢測29
• 3.5 BMMSCs成骨成脂分化能力的鑒定29-30
• 4 討論30-32
• 第二部分 細(xì)胞膜片制備以及膜片相關(guān)檢測32-38
• 1 材料32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料32
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器32
• 2 方法32-33
• 2.1 分離培養(yǎng)BMMSCs，，EPCs32
• 2.2 制備細(xì)胞膜片32-33
• 2.2.1 BMMSCs/EPCs膜片的制備32
• 2.2.2 BMMSCs膜片的制備32-33
• 2.2.3 EPCs膜片的制備33
• 2.3 BMMSCs/EPCs直接共培養(yǎng)，細(xì)胞標(biāo)記液分別標(biāo)記BMMSCs/EPCs33
• 2.4 BMMSCs/EPCs膜片、EPCs膜片以及BMMSCs膜片的檢測33
• 3 結(jié)果33-36
• 3.1 BMMSCs與EPCs直接共培養(yǎng)，細(xì)胞標(biāo)記液分別標(biāo)記BMMSCs，EPCs33-34
• 3.2 BMMSCs/EPCs膜片、EPCs膜片以及BMMSCs膜片的檢測34-36
• 4 討論36-38
• 第三部分 細(xì)胞膜片植入骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的體內(nèi)研究38-44
• 1 材料38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料38
• 1.2 實(shí)驗(yàn)動物38
• 2 方法38-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)分組38
• 2.2 大鼠牙槽骨缺損模型的制備及細(xì)胞膜片的植入38-39
• 2.3 細(xì)胞膜片修復(fù)大鼠牙槽骨缺損效果檢測39
• 2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法39
• 3 結(jié)果39-42
• 3.1 Micro-CT檢測及結(jié)果分析39-41
• 3.2 骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨切片HE染色41-42
• 4 討論42-44
• 小結(jié)44-46
• 參考文獻(xiàn)46-57
• 個人簡歷和研究成果57-58
• 致謝58

本文編號：916040