本文關鍵詞：對神經嵴干細胞潛在的成牙特性的研究

  更多相關文章： 組織工程 顱神經管 神經嵴干細胞 牙齒再生

【摘要】：目的:近年來,牙齒的發(fā)育以及干細胞理論的牙齒再生技術成為人們研究的熱點,而神經嵴干細胞(NCSCs)是一類多能的干細胞胚胎的細胞群,有助于各種顱面結構包括牙齒的形成,對于干細胞生物學和再生醫(yī)學是一項重要的發(fā)展。通過動物實驗,觀察神經嵴干細胞的潛在成牙特性,為組織工程化牙齒的體內構建探尋新的再生資源與環(huán)境。方法:選擇健康成年ICR孕鼠1-3只,體重約20 g~25 g,懷孕時間8.5 d。在體視顯微鏡下從該孕鼠的胚胎中分離出第4-6體節(jié),使所取顱神經管中遷移出神經嵴干細胞,對細胞進行培養(yǎng)與傳代。用免疫熒光法對所取細胞進行組織學鑒定,從而為觀察神經嵴干細胞的潛在成牙特性提供理論依據(jù)。結果:1.實驗過程中標本的形態(tài)學觀察:在體視顯微鏡下觀察到ED8.5孕鼠子宮和胚胎。成功截取胚胎第4-6神經節(jié),并分離出顱神經管結構。證明獲取的小鼠顱神經管正常可用。2.神經嵴干細胞的顯微鏡下觀察:培養(yǎng)細胞到第2天時,在顯微鏡下可見神經嵴干細胞從顱神經管邊緣遷移出來,圍繞顱神經管生長,細胞形態(tài)為梭狀形,胞核中等,胞質豐富。同時還觀察了培養(yǎng)細胞到第4天,以及傳代至第2代培養(yǎng)到第2天時的形態(tài)。證明神經嵴干細胞的培養(yǎng)與傳代均正常。3.免疫熒光實驗的結果:將培養(yǎng)的第3代神經嵴干細胞進行免疫熒光鑒定,熒光顯微鏡顯示結果為:特異性抗體P75,HNK-1,AP2α為陽性;分化抗體PAX6,SOX2為陰性。證明神經嵴干細胞的均一穩(wěn)定狀態(tài)。4.體外誘導成牙預實驗的結果:原位雜交技術,免疫熒光方法檢測成牙潛能相關基因PAX9,FGF10,BMP4等的表達。采用基因插入GFP使細胞定位,顯示神經嵴干細胞緊密圍繞上皮組織生長,證明其特性與牙源性間充質細胞相似。結論:1.建立了穩(wěn)定的神經嵴干細胞分離方法,采用無血清培養(yǎng)基可傳代培養(yǎng)。2.神經嵴干細胞在形態(tài)、基因表達、特異性蛋白標記的檢測等方面均獲得穩(wěn)定的表達結果。
【關鍵詞】：組織工程 顱神經管 神經嵴干細胞 牙齒再生
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R78
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-17
• 1. 干細胞技術與牙齒再生的研究現(xiàn)狀10-13
• 2. 神經嵴干細胞對牙齒形成作用的研究現(xiàn)狀13-14
• 3. 免疫熒光技術在口腔醫(yī)學中的應用14-16
• 4. 本研究的目的和意義16-17
• 材料與方法17-24
• 1．實驗材料17-18
• 1.1 主要實驗儀器及設備17
• 1.2 主要實驗試劑17-18
• 1.3 實驗動物18
• 2．實驗方法18-24
• 2.1 實驗前期主要材料的準備18-19
• 2.2 實驗模型的建立19-22
• 2.3 實驗后觀察指標22-24
• 結果24-26
• 1. 實驗過程中標本的形態(tài)學觀察24
• 2. 神經嵴干細胞的顯微鏡下觀察24
• 3. 免疫熒光實驗的結果24-25
• 4. 體外誘導成牙預實驗的結果25-26
• 討論26-31
• 1. 小鼠胚胎的選擇26-27
• 2. 神經嵴干細胞的形態(tài)27-28
• 3. 免疫熒光標志物的選擇28-29
• 4. 實驗創(chuàng)新之處29-31
• 結論31-32
• 參考文獻32-38
• 附錄一 英文縮略語詞表38-39
• 附錄二 附圖及說明39-45
• 在校期間發(fā)表論文及參加學術活動45-46
• 致謝46

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本文編號：907727