本文關(guān)鍵詞：對神經(jīng)嵴干細(xì)胞潛在的成牙特性的研究

  更多相關(guān)文章： 組織工程 顱神經(jīng)管 神經(jīng)嵴干細(xì)胞 牙齒再生

【摘要】：目的:近年來,牙齒的發(fā)育以及干細(xì)胞理論的牙齒再生技術(shù)成為人們研究的熱點(diǎn),而神經(jīng)嵴干細(xì)胞(NCSCs)是一類多能的干細(xì)胞胚胎的細(xì)胞群,有助于各種顱面結(jié)構(gòu)包括牙齒的形成,對于干細(xì)胞生物學(xué)和再生醫(yī)學(xué)是一項(xiàng)重要的發(fā)展。通過動物實(shí)驗(yàn),觀察神經(jīng)嵴干細(xì)胞的潛在成牙特性,為組織工程化牙齒的體內(nèi)構(gòu)建探尋新的再生資源與環(huán)境。方法:選擇健康成年ICR孕鼠1-3只,體重約20 g~25 g,懷孕時(shí)間8.5 d。在體視顯微鏡下從該孕鼠的胚胎中分離出第4-6體節(jié),使所取顱神經(jīng)管中遷移出神經(jīng)嵴干細(xì)胞,對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)與傳代。用免疫熒光法對所取細(xì)胞進(jìn)行組織學(xué)鑒定,從而為觀察神經(jīng)嵴干細(xì)胞的潛在成牙特性提供理論依據(jù)。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)過程中標(biāo)本的形態(tài)學(xué)觀察:在體視顯微鏡下觀察到ED8.5孕鼠子宮和胚胎。成功截取胚胎第4-6神經(jīng)節(jié),并分離出顱神經(jīng)管結(jié)構(gòu)。證明獲取的小鼠顱神經(jīng)管正常可用。2.神經(jīng)嵴干細(xì)胞的顯微鏡下觀察:培養(yǎng)細(xì)胞到第2天時(shí),在顯微鏡下可見神經(jīng)嵴干細(xì)胞從顱神經(jīng)管邊緣遷移出來,圍繞顱神經(jīng)管生長,細(xì)胞形態(tài)為梭狀形,胞核中等,胞質(zhì)豐富。同時(shí)還觀察了培養(yǎng)細(xì)胞到第4天,以及傳代至第2代培養(yǎng)到第2天時(shí)的形態(tài)。證明神經(jīng)嵴干細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代均正常。3.免疫熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果:將培養(yǎng)的第3代神經(jīng)嵴干細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光鑒定,熒光顯微鏡顯示結(jié)果為:特異性抗體P75,HNK-1,AP2α為陽性;分化抗體PAX6,SOX2為陰性。證明神經(jīng)嵴干細(xì)胞的均一穩(wěn)定狀態(tài)。4.體外誘導(dǎo)成牙預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果:原位雜交技術(shù),免疫熒光方法檢測成牙潛能相關(guān)基因PAX9,FGF10,BMP4等的表達(dá)。采用基因插入GFP使細(xì)胞定位,顯示神經(jīng)嵴干細(xì)胞緊密圍繞上皮組織生長,證明其特性與牙源性間充質(zhì)細(xì)胞相似。結(jié)論:1.建立了穩(wěn)定的神經(jīng)嵴干細(xì)胞分離方法,采用無血清培養(yǎng)基可傳代培養(yǎng)。2.神經(jīng)嵴干細(xì)胞在形態(tài)、基因表達(dá)、特異性蛋白標(biāo)記的檢測等方面均獲得穩(wěn)定的表達(dá)結(jié)果。
【關(guān)鍵詞】：組織工程 顱神經(jīng)管 神經(jīng)嵴干細(xì)胞 牙齒再生
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R78
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 前言9-17
• 1. 干細(xì)胞技術(shù)與牙齒再生的研究現(xiàn)狀10-13
• 2. 神經(jīng)嵴干細(xì)胞對牙齒形成作用的研究現(xiàn)狀13-14
• 3. 免疫熒光技術(shù)在口腔醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用14-16
• 4. 本研究的目的和意義16-17
• 材料與方法17-24
• 1．實(shí)驗(yàn)材料17-18
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備17
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動物18
• 2．實(shí)驗(yàn)方法18-24
• 2.1 實(shí)驗(yàn)前期主要材料的準(zhǔn)備18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕?/span>19-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)后觀察指標(biāo)22-24
• 結(jié)果24-26
• 1. 實(shí)驗(yàn)過程中標(biāo)本的形態(tài)學(xué)觀察24
• 2. 神經(jīng)嵴干細(xì)胞的顯微鏡下觀察24
• 3. 免疫熒光實(shí)驗(yàn)的結(jié)果24-25
• 4. 體外誘導(dǎo)成牙預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果25-26
• 討論26-31
• 1. 小鼠胚胎的選擇26-27
• 2. 神經(jīng)嵴干細(xì)胞的形態(tài)27-28
• 3. 免疫熒光標(biāo)志物的選擇28-29
• 4. 實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新之處29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 附錄一 英文縮略語詞表38-39
• 附錄二 附圖及說明39-45
• 在校期間發(fā)表論文及參加學(xué)術(shù)活動45-46
• 致謝46

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本文編號：907727