本文關(guān)鍵詞：EPCs與BMSCs復(fù)合細胞膜片促進放療區(qū)種植體骨結(jié)合的實驗研究

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【摘要】：【背景與目的】頭面部惡性腫瘤患者,通常需要采用手術(shù)聯(lián)合放療的治療方案。術(shù)后軟硬組織的缺損修復(fù)一直是頜面修復(fù)的難題。種植體技術(shù)的出現(xiàn),為顱頜面缺損修復(fù)提供了良好的固位和支持,同時也是修復(fù)牙列缺損或缺失的重要手段。但是,臨床研究證明放療會明顯降低種植體成功率,破壞種植體周圍骨組織的成骨活性和微循環(huán)。目前,使用高壓氧治療來提高放療區(qū)種植體骨結(jié)合在臨床上已得到應(yīng)用,但其有效性頗具爭議。國內(nèi)外也有研究者嘗試采用種植體表面處理來解決這一問題,但未形成有效的解決方案。本課題組前期提出了應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,BMSCs)膜片進行種植體表面修飾,體外構(gòu)建組織工程化種植體,利用細胞膜片促進種植體周圍骨組織再生及骨結(jié)合。后期研究發(fā)現(xiàn)單純利用BMSCs很難在放療區(qū)維持成骨持續(xù)性和促進微血管再生。目前的研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)能通過參與血管構(gòu)建或旁分泌作用促進血管再生,已應(yīng)用于多種組織缺血模型的修復(fù),在構(gòu)建血管化組織工程骨中也得到了應(yīng)用�；谝陨戏治�,本課題擬采用EPCs和BMSCs構(gòu)建復(fù)合細胞膜片種植體復(fù)合物,通過研究其體外成骨分化能力和異位成骨能力,以及植入放療動物模型后骨結(jié)合形成能力,探討應(yīng)用EPCs和BMSCs復(fù)合細胞膜片提高放療區(qū)種植體骨結(jié)合的可行性�！痉椒ā�1.采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠BMSCs,鑒定其成骨、成脂分化能力和細胞表型。采用差速貼壁法、密度梯度離心法分離培養(yǎng)大鼠EPCs,檢測細胞表型、Weible-Palade小體,鑒定管腔形成、吞噬Dil-Ac-LDL和結(jié)合FITC-UEA-1的能力。2.按不同比例對BMSCs和EPCs進行直接共培養(yǎng),根據(jù)成骨相關(guān)基因及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達量篩選共培養(yǎng)比例。按所選比例培養(yǎng)復(fù)合細胞膜片。3.細胞膜片與種植體材料復(fù)合,使用掃描電鏡觀察表面形貌。將細胞膜片-種植體復(fù)合物成骨誘導(dǎo)5天后,采用堿性磷酸酶、天狼星紅、茜素紅染色、Real-time PCR和Western blot,檢測其體外成骨活性。4.將細胞膜片-種植體復(fù)合物移植于裸鼠皮下,8周后取材,采用Micro-CT和硬組織切片染色檢測復(fù)合細胞膜片種植體復(fù)合物的異位成骨能力。5.建立大鼠脛骨放療模型,在大鼠脛骨干骺端植入種植體。植入8周后取材,采用Micro-CT和硬組織切片染色觀察復(fù)合細胞膜片對骨結(jié)合的影響,取種植體周圍骨質(zhì)進行Real-time PCR檢測成骨相關(guān)基因及VEGF的表達�！窘Y(jié)果】1.BMSCs和EPCs符合各自特征。BMSCs具有成骨、成脂分化能力,表面分子CD29、CD90、CD105表達陽性,CD34、CD31表達陰性。EPCs表面分子CD31、CD144和VEGFR2表達陽性,胞內(nèi)可見Weible-Palade小體,具有管腔形成、吞噬Dil-Ac-LDL和結(jié)合FITC-UEA-1的能力。2.在本實驗選擇的共培養(yǎng)比例中,EPCs與BMSCs按比例為10:1共培養(yǎng)時成骨相關(guān)基因及VEGF表達量較高。EPCs與BMSCs共培養(yǎng)并進行成膜誘導(dǎo)可形成復(fù)合細胞膜片。復(fù)合細胞膜片能貼附并生長于種植體材料表面。3.BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片與種植體復(fù)合后經(jīng)過成骨誘導(dǎo),茜素紅染色較深,Real-time PCR檢測成骨相關(guān)基因及VEGF表達量較高,Western blot檢測成骨相關(guān)蛋白表達較高。4.在異位成骨實驗中,Micro-CT、VG染色顯示復(fù)合細胞膜片-種植體復(fù)合物周圍有新生骨質(zhì)生成,優(yōu)于其他組。5.在大鼠脛骨放療模型中,Micro-CT、硬組織切片形態(tài)學(xué)觀察顯示復(fù)合細胞膜片組種植體周圍骨質(zhì)形成優(yōu)于其他組,種植體周圍骨組織成骨相關(guān)基因及VEGF的表達量高。【結(jié)論】1.EPCs與BMSCs按比例為10:1共培養(yǎng),成骨相關(guān)基因及VEGF表達量較高,可用于構(gòu)建復(fù)合細胞膜片。2.BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片可在種植體表面貼附生長并具有良好的體內(nèi)、外成骨能力,可用于促進種植體周圍成骨。3.BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片可用于改善放療區(qū)種植體周圍的成骨能力,促進種植體骨結(jié)合。
【關(guān)鍵詞】：細胞膜片 骨髓間充質(zhì)干細胞 內(nèi)皮祖細胞 種植體 骨結(jié)合 放療
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R782
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 文獻回顧15-25
• 一、放療影響種植體骨結(jié)合的研究進展15-20
• 二、骨髓間充質(zhì)干細胞與內(nèi)皮祖細胞的研究進展20-25
• 第一部分 大鼠BMSCs和EPCs復(fù)合細胞膜片的構(gòu)建25-44
• 實驗一 大鼠BMSCs分離培養(yǎng)及鑒定25-31
• 1 材料25-26
• 2 方法26-27
• 3 結(jié)果27-29
• 4 討論29-31
• 實驗二 大鼠EPCs分離培養(yǎng)及鑒定31-37
• 1 材料31-32
• 2 方法32-33
• 3 結(jié)果33-35
• 4 討論35-37
• 實驗三 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片的構(gòu)建37-44
• 1 材料37
• 2 方法37-39
• 3 結(jié)果39-42
• 4 討論42-44
• 第二部分 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片種植體 復(fù)合物成骨能力的研究44-59
• 實驗一 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片種植體 復(fù)合物體外成骨能力的研究44-53
• 1 材料44-45
• 2 方法45-48
• 3 結(jié)果48-51
• 4 討論51-53
• 實驗二 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片種植體 復(fù)合物體內(nèi)成骨能力的研究53-59
• 1 材料53
• 2 方法53-55
• 3 結(jié)果55-57
• 4 討論57-59
• 第三部分 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片 對放療區(qū)骨結(jié)合的影響59-70
• 實驗一 大鼠脛骨放療模型的建立59-63
• 1 材料59
• 2 方法59-60
• 3 結(jié)果60
• 4 討論60-63
• 實驗二 BMSCs、EPCs復(fù)合細胞膜片促進 放療區(qū)骨結(jié)合的研究63-70
• 1 材料63
• 2 方法63-65
• 3 結(jié)果65-68
• 4 討論68-70
• 全文總結(jié)70-71
• 參考文獻71-79
• 個人簡歷和研究成果79-80
• 致謝80

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1 李然;方靖琴;陳曉;郭宇;艾華;張偉國;;EPCs示蹤大鼠腦原位膠質(zhì)瘤的動態(tài)MRI研究[J];磁共振成像;2014年04期

2 王雪梅;鄧明明;;EPCs與肝硬化門脈高壓癥的關(guān)系及其治療展望[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2012年24期

3 Xin-Peng Cong;Wen-Hui Wang;Xi Zhu;Can Jin;Liang Liu;Xin-Min Li;;Silence of STIM1 attenua=tes the proliferation and migration of EPCs after vascular injury and its mechanism[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2014年05期

4 劉超;郭朋舉;李圣博;姚星星;焦周陽;文冰;許華山;趙文增;;Combined Use of Transmyocardial Laser Revascularization and Endothelial Progenitor Cells Enhances Neovascularization and Regional Contractility in a Canine Model of Ischemic Hearts[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年02期

5 方立;陳美芳;余國龍;肖智林;陳曉彬;謝秀梅;;內(nèi)皮祖細胞對血管平滑肌細胞增殖的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年01期

6 陳琴;黃銘涵;江時森;徐標(biāo);;丹參多酚酸鹽修復(fù)糖基化終產(chǎn)物引起的晚期EPCs功能障礙及其分子機制[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年06期

7 ;A novel vWF A3-GPI modified EPCs to enhance its adhesion ability to collegen[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2011年04期

8 李巧;冉海濤;王志剛;鐘世根;凌智瑜;李攀;李興升;陳慶偉;;超聲微泡聯(lián)合Ad-EGFP/HIF-1α介導(dǎo)EPCs歸巢大鼠缺血心肌[J];中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2010年11期

9 常柏;李春深;;EPCs移植治療DR的研究新進展[J];實用糖尿病雜志;2012年04期

10 王航;尹揚光;李巍;鄧夢楊;康華麗;秦浙學(xué);王強;盧巍;劉潔;黃嵐;;過表達PDGFR-β的EPCs調(diào)控血管不良重構(gòu)[J];中國病理生理雜志;2012年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Alex F.Chen;;GTPCH I Overexpression Ameliorates Impaired EPCs Function in Type 1 Diabetes[A];中國藥理學(xué)會第十次全國學(xué)術(shù)會議�？痆C];2009年

2 崔斌;黃嵐;;eNOS基因修飾EPCs移植抑制損傷血管過度增殖改善血管內(nèi)皮功能[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 ;Dynamic Changes and Significance of Circulating EPCs、VWF and TM in Patients with Traumatic Brain Injury[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 冉海濤;李巧;王志剛;鐘世根;凌智瑜;李攀;李興升;陳慶偉;;超聲微泡聯(lián)合Ad-EGFP/HIF-1α介導(dǎo)EPCs歸巢大鼠缺血心肌的實驗研究[A];第十屆全國超聲心動圖學(xué)術(shù)會議論文[C];2010年

5 張曉蕓;崔曉棟;官秀梅;李宏;成敏;;穩(wěn)定細胞骨架對EPCs功能的影響[A];中國生理學(xué)會第九屆全國青年生理學(xué)工作者學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2011年

6 李巧;李興升;王志剛;冉海濤;鐘世根;凌智瑜;李攀;陳慶偉;;超聲微泡聯(lián)合Ad-EGFP/HIF-1α介導(dǎo)EPCs移植治療大鼠心肌梗死的研究[A];第十屆全國超聲心動圖學(xué)術(shù)會議論文[C];2010年

7 何智輝;;5-雜氮-2‘-脫氧胞苷對CSES所致EPCs功能及其Sca-1表達的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

8 楊瑞瑞;杜怡峰;郭守剛;;VEGF動員內(nèi)源性EPCs促進MCAO/R小鼠神經(jīng)功能修復(fù)[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國神經(jīng)免疫大會2013論文匯編[C];2013年

9 霍亞南;黎金鳳;;SDF-1對糖尿病患者外周血EPCs功能影響的研究[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會內(nèi)分泌專業(yè)委員會第二次學(xué)術(shù)會議、內(nèi)分泌與代謝性疾病中西醫(yī)結(jié)合診治新進展學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2013年

10 崔曉棟;張曉蕓;李宏;官秀梅;李鑫;成敏;;流體剪切應(yīng)力對EPCs生物學(xué)特性的影響[A];第十屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第十二屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2012年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 民涇;EPCs捕獲技術(shù)改善支架生物相容性[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

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1 Shah Ourban Ali;家禽EPCs分離培養(yǎng)及HGF對炎癥環(huán)境下EPCs功能的影響[D];浙江大學(xué);2015年

2 尉輝杰;阿托伐他汀動員EPCs延緩顱內(nèi)動脈瘤發(fā)展的機制及降低栓塞后復(fù)發(fā)的潛在價值[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

3 葉家欣;強化他汀治療促進EPCs動員改善心肌缺血的臨床和基礎(chǔ)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

4 陳飛蘭;內(nèi)皮祖細胞（EPCs）在膠質(zhì)瘤微血管構(gòu)筑表型異質(zhì)性形成中的作用及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

5 楊兆華;內(nèi)皮祖細胞（EPCs）對移植性動脈硬化的作用及其機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

6 王航;過表達PDGFR-β的EPCs在損傷血管修復(fù)中作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

7 崔斌;eNOS基因修飾EPCs移植與損傷內(nèi)膜修復(fù)的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 譚虎;vWF A3-GPI強化EPCs富集及其在損傷血管壁修復(fù)中作用的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

9 況春燕;STIM1/TRPC1復(fù)合體對EPCs修復(fù)損傷血管能力的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 喻楊;血管損傷修復(fù)中CCNI對EPCs功能的影響及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

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1 孫麗娜;Visfatin對內(nèi)皮祖細胞凋亡的影響及其機制探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 薛國能;用于捕獲和歸巢EPCs的Fucoidan與CD133抗體/SDF-1復(fù)合生物涂層的構(gòu)建[D];西南交通大學(xué);2015年

3 張碩;骨髓源性EPCs對脊髓源性NSCs增殖分化的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王芳娟;Klotho蛋白改善人EPCs功能、修復(fù)血管損傷的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 高玉元;絲蛋白涂層彈簧圈可控釋放SDF-1α及其誘導(dǎo)EPCs參與大鼠動脈瘤修復(fù)的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 買超平;中低海拔因素下冠心病患者EPCs數(shù)量及其與相關(guān)因子關(guān)系的實驗性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

7 王健;針?biāo)幉⒂脤馓撗鲎CMCAO模型大鼠海馬VEGF表達及外周血EPCs數(shù)目的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

8 黃佳雯;ZFP580調(diào)控eNOS/NO信號通路促進EPCs分化的分子機制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

9 南偉;不同來源的EPCs對NSCs增殖分化的影響[D];蘭州大學(xué);2016年

10 鄭淑欣;負載骨髓MSCs和/或EPCs的羊膜支架修復(fù)犬長段尿道缺損的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

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