本文關(guān)鍵詞：負(fù)載甲狀旁腺相關(guān)肽的聚乳酸緩釋微球體外促成骨作用研究

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【摘要】：研究背景及目的： 口腔內(nèi)種植修復(fù)已逐漸成為缺牙患者修復(fù)的主要方式之一，種植體的骨整合和長(zhǎng)期穩(wěn)定主要依賴(lài)充足的種植體周?chē)琴|(zhì)量,種植體周?chē)墙M織溶解造城的無(wú)菌性松動(dòng)是種植體失敗的普遍原因。骨質(zhì)疏松患者、牙槽骨局部骨缺損患者以及具有Ⅳ類(lèi)骨質(zhì)的患者，進(jìn)行種植手術(shù)時(shí)種植體均難以獲得最佳固位，大大降低了遠(yuǎn)期種植成功率。因此，如何在此類(lèi)患者中增強(qiáng)種植體固位成了亟待解決的問(wèn)題。 甲狀旁腺素(PTH)在人體內(nèi)由甲狀旁腺主細(xì)胞分泌，生物活性片段為PTH1-34，可介導(dǎo)成骨細(xì)胞合成代謝、刺激骨基質(zhì)分泌和抑制成骨細(xì)胞凋亡，是直接作用于骨和腎臟最重要的鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)因子。用于骨質(zhì)疏松及骨折或骨缺損患者可加快其骨修復(fù)，改善骨代謝。目前PTH（1-34）多以皮下注射為給藥方式，價(jià)格昂貴，半衰期短易變性，靶向性較差，給患者帶來(lái)痛苦和不便�？蒯尲夹g(shù)使生物活性制劑在體內(nèi)特定時(shí)間特定作用點(diǎn)的釋放成為可能，將生物活性劑包封進(jìn)可降解高分子聚合物材料中，可以保護(hù)有效成分不被體內(nèi)的酶降解，并可以控制和延長(zhǎng)其釋放濃度和持續(xù)時(shí)間，常用于體內(nèi)體外傳送藥物、激素、生長(zhǎng)因子等。聚乙交酯-丙交酯（PLGA）因其優(yōu)良的生物相容性、降解性及給藥量的可控性成為理想的給藥載體。已經(jīng)FDA批準(zhǔn)作為安全的生物材料應(yīng)用于臨床。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)雙乳液法制備了包載PTH（1-34）的PLGA微球，實(shí)現(xiàn)對(duì)PTH（1-34）的控釋?zhuān)瑢⑵渑c鼠源性成骨細(xì)胞系共培養(yǎng)，通過(guò)體外細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)擬對(duì)該載藥材料的促成骨作用效果做出評(píng)價(jià)。 方法： 將可降解的聚乳酸微球包載甲狀旁腺相關(guān)肽PTH（1-34），用NaOH-SDS法測(cè)定微球的載藥量后，用生理鹽水配置成終濃度一定（10-9mol/L）的藥物控釋溶液，將其與誘導(dǎo)分化后的MC3T3-E1細(xì)胞共培養(yǎng)，進(jìn)行ALP（堿性磷酸酶）染色、茜素紅染色，觀(guān)察其分化活性及體外礦化程度，在設(shè)定時(shí)間點(diǎn)（24h、72h）檢測(cè)該載藥微球?qū)C3T3-E1細(xì)胞RUNX2、ALP和VEGF的mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1、聚合物微球載藥率經(jīng)測(cè)得PLGA微球載藥率為0.78%。 2、堿性磷酸酶染色結(jié)果成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)72h后鋪板染色，細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)棕黑色的即為堿性磷酸酶活性部位，有的聚集成條塊狀，實(shí)驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組堿性磷酸酶染色程度高于空白對(duì)照組，呈強(qiáng)陽(yáng)性。 3、茜素紅染色結(jié)果成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)至28d時(shí)，鏡下見(jiàn)細(xì)胞呈現(xiàn)復(fù)層生長(zhǎng)，局部鈣鹽沉積處形成結(jié)節(jié)。茜素紅染色顯示:間歇給藥組（b組）和載藥微球組（e組）鈣結(jié)節(jié)直徑明顯較空白對(duì)照組（a組）大（P0.05），未載藥微球組（d組）鈣結(jié)節(jié)較少，，持續(xù)性給藥組（c組）未見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)。 4、成骨相關(guān)基因表達(dá)分析將各組細(xì)胞進(jìn)行成骨誘導(dǎo)24h、72h后，PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：RUNX2和ALP第三天的表達(dá)趨勢(shì)整體較第一天高，其中間歇給藥組（b組）和載藥微球組（e組）又明顯高于空白對(duì)照組(a組（)P0.05），ALPmRNA的表達(dá)趨勢(shì)與ALP染色結(jié)果一致；VEGF第一天表達(dá)較高，第三天有所下降，但實(shí)驗(yàn)組(e組)表達(dá)量始終高于空白組（P0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組（b組）表現(xiàn)一致。 結(jié)論： 1、負(fù)載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球具有較好的載藥率，可以為下一步細(xì)胞和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中藥物釋放終濃度的配制提供依據(jù)。 2、負(fù)載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球在體外可明顯促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞的ALP活性，提示此微球?qū)Τ晒腔钚杂忻黠@影響。 3、負(fù)載甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球可以促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞基質(zhì)鈣化。 4、負(fù)載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞成骨及成血管相關(guān)基因的mRNA表達(dá)，從分子水平再次證明聚乳酸微球載藥緩釋系統(tǒng)可顯著促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞體外成骨分化，預(yù)示此緩釋系統(tǒng)在口腔種植領(lǐng)域具有較好潛在應(yīng)用前景，為臨床解決種植體周?chē)橇坎蛔愕葐?wèn)題提供了新的可能的解決方案。
【關(guān)鍵詞】：PTH(1-34) 聚乳酸 控釋 分子生物學(xué)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R783.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-10
• 中英文詞對(duì)照表10-11
• 第1章 引言11-17
• 1.1 重組甲狀旁腺素 PTH（1-34）11-14
• 1.2 PTH 間歇給藥促進(jìn)成骨的細(xì)胞及分子機(jī)制14-15
• 1.3 PTH 的給藥方式及 PLGA 在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用15-17
• 第2章 材料和方法17-24
• 2.1 材料及主要試劑17-18
• 2.2 儀器18
• 2.3 方法18-24
• 第3章 結(jié)果24-29
• 3.1 聚合物微球的載藥率24
• 3.2 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細(xì)胞分化的影響24
• 3.3 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細(xì)胞體外礦化能力的影響24-26
• 3.4 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響26-29
• 第4章 討論29-33
• 4.1 體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞系的選擇29-30
• 4.2 PTH 對(duì)修復(fù)口腔內(nèi)局部骨缺損的意義30
• 4.3 載藥緩釋微球?qū)Υ俟切纬烧{(diào)節(jié)因子的作用30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果39-40
• 致謝40-41

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陸榮;張峰;丁翠翠;李蘇亞;;聚乳酸/羥基磷灰石微球的合成與性能[J];化工技術(shù)與開(kāi)發(fā);2010年09期

2 張士博;張U

本文編號(hào)：863906