本文關(guān)鍵詞：負載甲狀旁腺相關(guān)肽的聚乳酸緩釋微球體外促成骨作用研究

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【摘要】：研究背景及目的： 口腔內(nèi)種植修復(fù)已逐漸成為缺牙患者修復(fù)的主要方式之一，種植體的骨整合和長期穩(wěn)定主要依賴充足的種植體周圍骨質(zhì)量,種植體周圍骨組織溶解造城的無菌性松動是種植體失敗的普遍原因。骨質(zhì)疏松患者、牙槽骨局部骨缺損患者以及具有Ⅳ類骨質(zhì)的患者，進行種植手術(shù)時種植體均難以獲得最佳固位，大大降低了遠期種植成功率。因此，如何在此類患者中增強種植體固位成了亟待解決的問題。 甲狀旁腺素(PTH)在人體內(nèi)由甲狀旁腺主細胞分泌，生物活性片段為PTH1-34，可介導(dǎo)成骨細胞合成代謝、刺激骨基質(zhì)分泌和抑制成骨細胞凋亡，是直接作用于骨和腎臟最重要的鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)因子。用于骨質(zhì)疏松及骨折或骨缺損患者可加快其骨修復(fù)，改善骨代謝。目前PTH（1-34）多以皮下注射為給藥方式，價格昂貴，半衰期短易變性，靶向性較差，給患者帶來痛苦和不便�？蒯尲夹g(shù)使生物活性制劑在體內(nèi)特定時間特定作用點的釋放成為可能，將生物活性劑包封進可降解高分子聚合物材料中，可以保護有效成分不被體內(nèi)的酶降解，并可以控制和延長其釋放濃度和持續(xù)時間，常用于體內(nèi)體外傳送藥物、激素、生長因子等。聚乙交酯-丙交酯（PLGA）因其優(yōu)良的生物相容性、降解性及給藥量的可控性成為理想的給藥載體。已經(jīng)FDA批準作為安全的生物材料應(yīng)用于臨床。本實驗通過雙乳液法制備了包載PTH（1-34）的PLGA微球，實現(xiàn)對PTH（1-34）的控釋，將其與鼠源性成骨細胞系共培養(yǎng)，通過體外細胞學(xué)和分子生物學(xué)實驗擬對該載藥材料的促成骨作用效果做出評價。 方法： 將可降解的聚乳酸微球包載甲狀旁腺相關(guān)肽PTH（1-34），用NaOH-SDS法測定微球的載藥量后，用生理鹽水配置成終濃度一定（10-9mol/L）的藥物控釋溶液，將其與誘導(dǎo)分化后的MC3T3-E1細胞共培養(yǎng)，進行ALP（堿性磷酸酶）染色、茜素紅染色，觀察其分化活性及體外礦化程度，在設(shè)定時間點（24h、72h）檢測該載藥微球?qū)C3T3-E1細胞RUNX2、ALP和VEGF的mRNA表達的影響。 結(jié)果： 1、聚合物微球載藥率經(jīng)測得PLGA微球載藥率為0.78%。 2、堿性磷酸酶染色結(jié)果成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)72h后鋪板染色，細胞內(nèi)呈現(xiàn)棕黑色的即為堿性磷酸酶活性部位，有的聚集成條塊狀，實驗組及陽性對照組堿性磷酸酶染色程度高于空白對照組，呈強陽性。 3、茜素紅染色結(jié)果成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)至28d時，鏡下見細胞呈現(xiàn)復(fù)層生長，局部鈣鹽沉積處形成結(jié)節(jié)。茜素紅染色顯示:間歇給藥組（b組）和載藥微球組（e組）鈣結(jié)節(jié)直徑明顯較空白對照組（a組）大（P0.05），未載藥微球組（d組）鈣結(jié)節(jié)較少，，持續(xù)性給藥組（c組）未見鈣結(jié)節(jié)。 4、成骨相關(guān)基因表達分析將各組細胞進行成骨誘導(dǎo)24h、72h后，PCR檢測結(jié)果顯示：RUNX2和ALP第三天的表達趨勢整體較第一天高，其中間歇給藥組（b組）和載藥微球組（e組）又明顯高于空白對照組(a組（)P0.05），ALPmRNA的表達趨勢與ALP染色結(jié)果一致；VEGF第一天表達較高，第三天有所下降，但實驗組(e組)表達量始終高于空白組（P0.05），與陽性對照組（b組）表現(xiàn)一致。 結(jié)論： 1、負載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球具有較好的載藥率，可以為下一步細胞和分子生物學(xué)實驗中藥物釋放終濃度的配制提供依據(jù)。 2、負載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球在體外可明顯促進MC3T3-E1細胞的ALP活性，提示此微球?qū)Τ晒腔钚杂忻黠@影響。 3、負載甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球可以促進MC3T3-E1細胞基質(zhì)鈣化。 4、負載了甲狀旁腺相關(guān)肽的PLGA微球促進MC3T3-E1細胞成骨及成血管相關(guān)基因的mRNA表達，從分子水平再次證明聚乳酸微球載藥緩釋系統(tǒng)可顯著促進MC3T3-E1細胞體外成骨分化，預(yù)示此緩釋系統(tǒng)在口腔種植領(lǐng)域具有較好潛在應(yīng)用前景，為臨床解決種植體周圍骨量不足等問題提供了新的可能的解決方案。
【關(guān)鍵詞】：PTH(1-34) 聚乳酸 控釋 分子生物學(xué)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 目錄9-10
• 中英文詞對照表10-11
• 第1章 引言11-17
• 1.1 重組甲狀旁腺素 PTH（1-34）11-14
• 1.2 PTH 間歇給藥促進成骨的細胞及分子機制14-15
• 1.3 PTH 的給藥方式及 PLGA 在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用15-17
• 第2章 材料和方法17-24
• 2.1 材料及主要試劑17-18
• 2.2 儀器18
• 2.3 方法18-24
• 第3章 結(jié)果24-29
• 3.1 聚合物微球的載藥率24
• 3.2 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細胞分化的影響24
• 3.3 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細胞體外礦化能力的影響24-26
• 3.4 載藥聚合物微球?qū)?MC3T3-E1 細胞相關(guān)基因表達的影響26-29
• 第4章 討論29-33
• 4.1 體外培養(yǎng)成骨細胞系的選擇29-30
• 4.2 PTH 對修復(fù)口腔內(nèi)局部骨缺損的意義30
• 4.3 載藥緩釋微球?qū)Υ俟切纬烧{(diào)節(jié)因子的作用30-33
• 第5章 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-39
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果39-40
• 致謝40-41

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陸榮;張峰;丁翠翠;李蘇亞;;聚乳酸/羥基磷灰石微球的合成與性能[J];化工技術(shù)與開發(fā);2010年09期

2 張士博;張U

本文編號：863906