本文關(guān)鍵詞：Er:YAG激光對人牙周膜細胞增殖和成骨分化的影響

  更多相關(guān)文章： Er:YAG激光 人牙周膜細胞 細胞增殖 細胞遷移 克隆形成 轉(zhuǎn)化生長因子β1 成骨分化

【摘要】：背景人牙周膜中含有一群異質(zhì)性較強的復(fù)雜的牙周膜細胞群,主要包括成纖維細胞、成骨細胞、破骨細胞以及未分化的間充質(zhì)細胞。hPDLCs為該細胞群中最常見的細胞類型,牙周膜細胞具有較強的自我更新及增殖能力,并有較強的分化能力,能不斷形成新的纖維及牙骨質(zhì),在牙槽骨改建與牙周再生中起重要作用。鉺激光(erbium-doped:yttrium-aluminium-garnet, Er:YAG laser)是波長為2940 nm的近紅外激光,極易被水吸收,故產(chǎn)熱少,對組織損傷小,同時由于其具有良好的切割軟硬組織的功效,近年來逐漸被認為是牙周治療時最具應(yīng)用前景的激光之一。盡管目前對Er:YAG激光的研究報道較多,然而,關(guān)于Er:YAG激光對hPDLCs影響的研究報道尚不多見。鑒于牙周膜細胞在牙周組織修復(fù)中的重要作用,本實驗擬通過噻唑藍(methyl-thiazolyl-tetrazolium, MTT)法、克隆形成實驗、劃痕實驗、酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白免疫印跡法(Western blot, WB)等不同實驗方法,觀察不同輸出功率、相同照射時間和不同照射時間、相同照射功率的Er:YAG激光照射對hPDLCs增殖和分化的影響,為Er:YAG激光在牙周病治療中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。目的1.比較不同輸出功率和照射時間Er:YAG激光照射對體外培養(yǎng)的hPDLCs增殖和遷移的影響2.比較不同輸出功率和照射時間Er:YAG激光照射對體外培養(yǎng)的hPDLCs成骨向分化的影響。方法 首先收集就診于南京醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院頜面外科因阻生需要拔除的健康第三磨牙(所選牙齒均無齲壞、根尖周炎及牙周炎),采用胰酶加膠原酶消化法分離培養(yǎng)hPDLCs,傳至第3代細胞行角蛋白、波形絲蛋白染色,鑒定hPDLCs來源,第3-6代用于后續(xù)實驗。然后按不同的輸出功率、相同照射時間(0 W、0.45 W、0.6 W、0.75 W,10 s)及不同照射時間、相同輸出功率(0s、10s、30s、60s,0.6W)對接種細胞行Er:YAG激光照射,通過MTT法、克隆形成實驗、劃痕實驗、Elisa實驗、Western blot觀察Er:YAG激光照射對hPDLCs增殖、克隆形成能力、細胞遷移、轉(zhuǎn)化生長因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)分泌及成骨相關(guān)蛋白堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨鈣素(osteocalcin, OCN)、核心結(jié)合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2, Runx2)表達的影響。結(jié)果 1.光學顯微鏡下觀察,用胰酶加膠原酶消化法能成功分離得到長梭形、胞體豐滿、胞漿均勻的細胞。免疫細胞化學染色波形絲蛋白呈陽性,角蛋白呈陰性,證明細胞來源于中胚層。2.輸出功率為0.45 W、0.6 W,照射時間10s時,可促進細胞的增殖及克隆形成(P0.05),遷移速度較對未照射組快,TGF-β1分泌也較未接受激光照射組多(P0.05)。但此兩組間差異無顯著性。不同的照射時間進行比較,照射時間10 s時細胞增殖及克隆形成率明顯高于未接受激光照射組(P0.05),遷移速度較未照射組加快,TGF-β1分泌較對照組多(P0.05)。60s反之(P0.05)。3.輸出功率為0.45W、0.6 W,照射時間10s時,在第3、5、7 d成骨相關(guān)蛋白ALP、Runx2表達高于未接受激光照射組(P0.05),在第5d達最大值。OCN的表達在第3、5、7d高于未接受激光照射組(P0.05),第7d表達最高。但此兩組間差異無顯著性。不同的照射時間進行比較,ALP、Runx2表達在第3、5、7d高于對照組,第5d表達量最高。OCN的表達在第3、5、7d高于對照組(P0.05),第7d表達量最高。60s反之。結(jié)論 1.可以通過胰酶加膠原酶消化法分離hPDLCs,結(jié)合取樣部位、細胞鏡下形態(tài)及免疫細胞化學染色結(jié)果,可確定為hPDLCs。2.在適度的功率和照射時間時,Er:YAG激光對hPDLCs增殖、克隆形成、遷移、TGF-β1分泌具有促進作用。3.在適度的功率和照射時間時,Er:YAG激光對hPDLCs ALP、OCN、Runx2表達具有促進作用。
【關(guān)鍵詞】：Er:YAG激光 人牙周膜細胞 細胞增殖 細胞遷移 克隆形成 轉(zhuǎn)化生長因子β1 成骨分化
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 前言5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-14
• 縮略詞表14-16
• 第一章 緒論16-21
• 第二章 hPDLCs的分離培養(yǎng)及鑒定21-26
• 1. 材料與方法21-23
• 2. 實驗結(jié)果23
• 3. 討論23-26
• 第三章 Er：YAG激光對hPDLCs增殖和遷移的影響26-41
• 1. 材料與方法26-32
• 2. 實驗結(jié)果32-39
• 3. 討論39-41
• 第四章 Er：YAG激光對hPDLCs成骨分化的影響41-55
• 1. 材料與方法41-44
• 2. 實驗結(jié)果44-52
• 3. 討論52-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻56-63
• 附錄63-64
• 致謝64-65

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本文編號：791051