本文關(guān)鍵詞：前列腺素E2受體EPs在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義

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【摘要】：口腔鱗狀細(xì)胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一,流行病學(xué)調(diào)查表明其發(fā)病年齡趨于年輕化,己成為威脅人類健康的重要疾病之一。目前對于早期OSCC患者,主要采用手術(shù)治療,而對于中晚期OSCC患者,主要采用以手術(shù)治療為主,放射治療及化學(xué)治療為輔的綜合序列治療。雖然對OSCC的研究逐漸深入,并探索許多預(yù)防及治療OSCC的手段,但由于口腔頜面部血運及淋巴引流豐富,口腔鱗狀細(xì)胞癌易發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且五年復(fù)發(fā)率高,中晚期OSCC的治療效果及預(yù)后仍不滿意,特別是復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的機制仍不十分清楚,有待我們進(jìn)一步深入研究�；ㄉ南┧釣槎级嗖伙柡椭舅�,屬Omega6族長鏈多元不飽和脂肪酸。其中含有四個碳.碳雙鍵,一個碳.氧雙鍵,為高級不飽和脂肪酸。研究表明,花生四烯酸不僅是富含能量的分子,其亦可以參與一些基因的誘導(dǎo),在癌癥的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用�；ㄉ南┧峥梢越�(jīng)過磷脂酶A2、環(huán)氧化酶、脂氧化酶、細(xì)胞色素P450的代謝,分別產(chǎn)生溶血磷脂素類、前列腺素類物、白三烯、羥基二十碳五烯酸及環(huán)氧二十碳五烯酸,這些產(chǎn)物在生理及病理過程中發(fā)揮了重要作用�；ㄉ南┧岬拇x酶及其相應(yīng)產(chǎn)物協(xié)調(diào)了炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)多種生物學(xué)行為,包括細(xì)胞增殖、存活、血管生成、入侵及轉(zhuǎn)移等,其亦可以促進(jìn)癌癥的發(fā)生發(fā)展。目前關(guān)于花生四烯酸促腫瘤作用的研究主要集中于花生四烯酸的環(huán)氧化酶代謝信號通路。我們及許多學(xué)者研究均發(fā)現(xiàn),包括口腔鱗狀細(xì)胞癌在內(nèi)的許多惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及對治療效果的影響等均與環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase,COX)及其代謝產(chǎn)物前列腺素E2密切相關(guān),因此其有可能成為惡性腫瘤治療的重要靶向。COX是花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)向前列腺素類物質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中的重要限速酶,目前發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶有兩個亞型：即COX-1和COX-2。COX-1是一種持續(xù)表達(dá)于大多數(shù)正常組織細(xì)胞內(nèi)的“結(jié)構(gòu)酶”,在多種生理學(xué)功能過程中發(fā)揮重要作用,例如,促進(jìn)血小板凝聚、抑制胃酸過量分泌、調(diào)節(jié)腎小球血流量并可參與分娩過程等。COX-2是一種“誘導(dǎo)型酶”,在絕大多數(shù)正常組織內(nèi)檢測不到,但當(dāng)細(xì)胞受到炎癥因子,細(xì)胞因子,促有絲分裂原,促癌因子等刺激后,便可產(chǎn)生大量的COX-2。研究發(fā)現(xiàn),COX-2在許多惡性腫瘤組織中呈高表達(dá),并且可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展,例如,結(jié)直腸癌,乳腺癌,肺癌,前列腺癌,頭頸部癌及口腔癌等。流行病學(xué)調(diào)查表明,長期服用阿斯匹林的關(guān)節(jié)炎病人,其結(jié)直腸癌的發(fā)生率降低。臨床觀察證明,吲哚美辛可以誘導(dǎo)乳腺癌及皮膚鱗狀細(xì)胞癌癌細(xì)胞的退化。關(guān)于非甾體類抗炎藥物抑制腫瘤生長的機制仍不清楚,但可以肯定的是,其可以抑制環(huán)氧化酶的活化,進(jìn)而抑制前列腺素類物質(zhì)的產(chǎn)生,進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、壞死、免疫反應(yīng)等病理過程。似乎,阿斯匹林等非甾體類抗炎藥物是一種非常有前途的治療癌癥的藥物。但臨床觀察同時表明,長期服用阿斯匹林等非甾體類抗炎藥物有心血管及胃腸道系統(tǒng)的副作用。這些副作用阻礙了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。于是人們開始探索COX-2下游信號通路,尋找更加安全有效的分子作用靶點,以期避免抑制COX-2所帶來的副作用。COX-2的下游產(chǎn)物中,與癌癥發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的是前列腺素E2(PGE2)。PGE2在許多癌癥組織中呈現(xiàn)高表達(dá),并可以促進(jìn)許多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展,例如,結(jié)直腸癌,前列腺癌,皮膚癌,口腔癌等。研究證明,PGE2可從以下幾個方面促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展：(1)其可促進(jìn)一些生長因子受體誘導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)；(2)其通過上調(diào)Bcl-2分子的表達(dá)來抑制癌細(xì)胞的凋亡；(3)其與血管生成因子的產(chǎn)生有關(guān),如血管內(nèi)皮生長因子；(4)其可抑制免疫調(diào)節(jié)淋巴因子的產(chǎn)生、抑制T細(xì)胞和B細(xì)胞的增殖,抑制腫瘤壞死因子和天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用,從而抑制局部免疫反應(yīng),使得癌細(xì)胞能夠逃避免疫系統(tǒng)的攻擊；(5)其可促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲特性,從而促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。PGE2主要通過四種EP受體發(fā)揮生理學(xué)及病理學(xué)作用,即EP1,EP2,EP3及EP4。了解EP受體的作用及其相應(yīng)機制潛在的提供了預(yù)防及治療口腔鱗狀細(xì)胞癌的分子作用靶點。EP受體屬于G蛋白結(jié)合受體,具有七次跨膜結(jié)構(gòu)域,每一種EP受體分別與不同的異源性三聚體Gα亞單位相結(jié)合。EP2和EP4受體與Gas亞單位相結(jié)合,EPl受體與Gq亞單位相結(jié)合,而EP3受體與Gi亞單位相結(jié)合。四種EP受體與不同的Ga亞單位相結(jié)合,導(dǎo)致了四種EP受體所激活的下流信號通路不同,進(jìn)而導(dǎo)致了其所介導(dǎo)的生物學(xué)作用不同。EP受體所活化的信號通路是背景特異性的,很可能依賴PGE2的表達(dá)水平、不同EP受體的表達(dá)水平以及其他相互作用受體的表達(dá)水平。不同的EP受體在同一種類型的癌癥中可能發(fā)揮不同的作用,而同一種EP受體在不同的癌癥中亦可能發(fā)揮不同的作用。一般地,通過調(diào)節(jié)G蛋白的表達(dá),EP1受體的活化可以促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的流動。EP2和EP4受體通過活化G蛋白可以活化細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶,而EP3受體的活化可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣離子的流動或抑制G蛋白的活性進(jìn)而抑制細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶。目前的研究主要集中于鑒定出哪一種EP受體介導(dǎo)了PGE2的腫瘤促進(jìn)作用和所涉及的信號通路。大量的研究表明EP受體在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色。例如,在肝細(xì)胞癌中,EP1受體的活化可以激活PKC/NF-κB/FoXC2信號通路,促進(jìn)β1-integrin的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。在肝細(xì)胞癌中,EP2受體的活化可以激活Src/EGFR/Akt/mTOR信號通路,上調(diào)Snail蛋白的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)肝癌細(xì)胞Huh-7細(xì)胞的入侵和轉(zhuǎn)移。在乳腺癌中,EP2及EP4受體的活化可以抑制NK細(xì)胞的功能,進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。EP受體的發(fā)現(xiàn)使通過抑制PGE2受體的活性從而抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展成為可能,同時也可避免因長期使用COX-2抑制劑而產(chǎn)生的胃腸道、心血管系統(tǒng)的并發(fā)癥。然而,關(guān)于EP受體在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其所介導(dǎo)的病理學(xué)作用仍不清楚,因此本實驗擬闡明口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中EP受體的表達(dá)模式,為研究EP受體在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用奠定理論基礎(chǔ)。第一章RT-PCR方法檢測口腔鱗癌組織中EPs受體mRNA的表達(dá)目的：檢測口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中EP1、EP2、EP3、EP4受體mRNA的表達(dá)。方法：收集2013年5月至2015年5月在南方醫(yī)院口腔頜面外科行手術(shù)治療的口腔鱗狀細(xì)胞癌病例40例,所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化學(xué)治療、放射治療或其他治療,且無癌癥家族史或其他并發(fā)癥。所有病例均經(jīng)術(shù)后常規(guī)HE染色證實為口腔鱗狀細(xì)胞癌。獲取40例口腔鱗癌標(biāo)本及相應(yīng)40例癌旁組織標(biāo)本(距離鱗癌組織約2 cm,且術(shù)中切緣冰凍病理檢查證實為癌細(xì)胞陰性)。將標(biāo)本保存于RNA-later溶液中,并迅速置于液氮中保存。實驗分為兩組：(1)實驗組：40例口腔鱗癌組織(2)對照組：40例癌旁組織。對EPs受體的表達(dá)進(jìn)行Real-time PCR檢測。設(shè)定癌旁組織中EPs受體mRNA的表達(dá)量為“1”,采用2-△△Ct方法檢測口腔鱗癌組織中EPs受體mRNA的表達(dá)。所有實驗均重復(fù)三次。β-actin作為內(nèi)參照。結(jié)果：實時定量PCR結(jié)果提示,與癌旁組織相比,鱗癌組織中EP1、EP2受體mRNA的表達(dá)量明顯升高,EP1、EP2受體mRNA的相對平均表達(dá)量分別為1.442±0.4245、1.207±0.4259,經(jīng)配對t檢驗,P值均0.05,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；與癌旁組織相比,EP3受體mRNA在口腔鱗癌組織中的表達(dá)明顯降低,相對平均表達(dá)量為0.4455±0.3292,經(jīng)配對t檢驗,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義：與癌旁組織相比,EP4受體mRNA的表達(dá)在口腔鱗癌組織中的表達(dá)升高,相對平均表達(dá)量為1.147±0.4965,經(jīng)配對t檢驗,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：EP1、EP2受體mRNA的表達(dá)顯著上調(diào),EP3受體mRNA的表達(dá)顯著下調(diào),EPs受體mRNA在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的異常表達(dá),可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色。第二章 免疫組織化學(xué)染色方法檢測口腔鱗癌組織中EPs受體蛋白的表達(dá)目的：檢測口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中EP1、EP2、EP3、EP4受體蛋白的表達(dá)。方法：收集2013年5月至2015年5月在南方醫(yī)院口腔頜面外科行手術(shù)治療的口腔鱗狀細(xì)胞癌病例40例,所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化學(xué)治療、放射治療或其他治療,且無癌癥家族史或其他并發(fā)癥。所有病例均經(jīng)術(shù)后常規(guī)HE染色證實為口腔鱗狀細(xì)胞癌。獲取40例口腔鱗癌標(biāo)本及相應(yīng)40例癌旁組織標(biāo)本(距離鱗癌組織約2 cm,且術(shù)中切緣冰凍病理檢查證實為癌細(xì)胞陰性)。標(biāo)本獲取后立即放于福爾馬林溶液中常溫保存。實驗分為兩組：(1)實驗組：40例口腔鱗癌組織(2)對照組：40例癌旁組織。對EPs受體蛋白的表達(dá)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。PBS溶液代替一抗作為陰性對照,己知陽性切片作為陽性對照。使用染色強度和陽性細(xì)胞數(shù)對染色結(jié)果進(jìn)行半定量。結(jié)果：EP1受體在大部分癌旁組織中呈弱陽性表達(dá),而在大部分口腔鱗癌組織中呈中等陽性表達(dá),經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗,T=55,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,口腔鱗癌組織中EP1受體蛋白的表達(dá)明顯升高。EP2受體在大部分癌旁組織中呈弱陽性表達(dá),而在大部分口腔鱗癌組織中呈中等陽性表達(dá),經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗,T=91,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,口腔鱗癌組織中EP2受體蛋白的表達(dá)明顯升高。EP3受體在大部分癌旁組織中呈中等陽性表達(dá),而在大部分口腔鱗癌組織中呈弱陽性表達(dá),經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗,T=-114,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,口腔鱗癌組織中EP3受體蛋白的表達(dá)明顯降低。EP4受體蛋白在大部分癌旁組織及口腔鱗癌組織中均呈中等陽性表達(dá),經(jīng)Wilcoxon符號秩和檢驗,T=14,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：EP1、EP2受體蛋白的表達(dá)顯著上調(diào),EP3受體蛋白的表達(dá)顯著下調(diào),EPs受體蛋白在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的異常表達(dá),可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要角色。第三章 酶聯(lián)免疫吸附實驗測定口腔鱗癌組織中花生四烯酸的表達(dá)目的：檢測口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中花生四烯酸的表達(dá)。方法：收集2013年5月至2015年5月在南方醫(yī)院口腔頜面外科行手術(shù)治療的口腔鱗狀細(xì)胞癌病例40例,所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過化學(xué)治療、放射治療或其他治療,且無癌癥家族史或其他并發(fā)癥。所有病例均經(jīng)術(shù)后常規(guī)HE染色證實為口腔鱗狀細(xì)胞癌。獲取40例口腔鱗癌標(biāo)本及相應(yīng)的40例癌旁組織標(biāo)本(距離鱗癌組織約2 cm,且術(shù)中切緣冰凍病理檢查證實為癌細(xì)胞陰性)。標(biāo)本獲取后立即存放于-80度冰箱備用。實驗分為兩組：(1)實驗組：40例口腔鱗癌組織(2)對照組：40例癌旁組織。對花生四烯酸的表達(dá)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附實驗。結(jié)果：與癌旁組織相比,花生四烯酸在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)明顯升高,40例口腔鱗癌組織中花生四烯酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為477.44-39.84 pg儋,40例癌旁組織中花生四烯酸的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為38.44-4.92 pg儋,經(jīng)配對t檢驗,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：花生四烯酸在口腔鱗癌組織中的表達(dá)顯著上調(diào),說明該條信號通路在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演了重要角色�？傊�,與癌旁組織相比,EP1、EP2受體在口腔鱗癌組織中表達(dá)升高,EP3受體在口腔鱗癌組織中表達(dá)降低,花生四烯酸在口腔鱗癌組織中表達(dá)顯著上調(diào),EP受體的異常表達(dá)及花生四烯酸的高表達(dá)可能與口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗狀細(xì)胞癌 花生四烯酸 環(huán)氧化酶2 EP受體 表達(dá)譜
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-19
• 前言19-24
• 第一章 RT-PCR方法檢測口腔鱗癌組織中EP受體mRNA的表達(dá)24-36
• 1 材料與方法24-29
• 2 結(jié)果29-32
• 3 討論32-36
• 第二章 免疫組織化學(xué)染色方法檢測口腔鱗癌組織中EP受體蛋白的表達(dá)36-48
• 1 材料與方法36-41
• 2 結(jié)果41-44
• 3 討論44-48
• 第三章 酶聯(lián)免疫吸附實驗測定口腔鱗癌組織中花生四烯酸的表達(dá)48-56
• 1 材料與方法48-51
• 2 結(jié)果51-52
• 3 討論52-56
• 全文總結(jié)56-57
• 參考文獻(xiàn)57-65
• 中英文對照縮略詞表65-66
• 碩士學(xué)位期間成果66-67
• 致謝67-69

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本文編號：783849