發(fā)布時間：2024-06-30 01:01

　　目的 通過RNA干擾沉默法尼基轉(zhuǎn)移酶(FTase),探討沉默F(xiàn)Tase對舌鱗狀細(xì)胞癌遷移和侵襲的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法 針對FTase設(shè)計并構(gòu)建3條小干擾RNA(siRNA),轉(zhuǎn)染人舌鱗狀細(xì)胞癌CAL27和SCC-4細(xì)胞(實驗組),同時設(shè)置陰性對照組(轉(zhuǎn)染NC-siRNA)和空白對照組(不轉(zhuǎn)染siRNA)。應(yīng)用實時熒光定量PCR檢測各組細(xì)胞FTase、HRAS的mRNA表達(dá),根據(jù)FTase mRNA的表達(dá)量,選取沉默效率最高的FTase-siRNA轉(zhuǎn)染組作為進(jìn)一步研究的實驗組。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測各組細(xì)胞FTase、HRAS、p65、p-p65(S536)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的蛋白表達(dá),Transwell侵襲實驗和細(xì)胞劃痕實驗檢測各組細(xì)胞的侵襲和遷移能力。結(jié)果 與陰性對照組和空白對照組相比,實驗組FTase的mRNA和蛋白表達(dá)下降(P<0.05),HRAS的mRNA和蛋白表達(dá)無明顯變化(P>0.05),p-p65(S536)、MMP-9、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)下降(P<0....

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圖1各組細(xì)胞FTase、HRASmRNA的表達(dá)

Transwell侵襲實驗結(jié)果表明,與空白對照組和陰性對照組相比,實驗組細(xì)胞通過Matrigel膠遷移到小室膜下的數(shù)量降低,表明實驗組細(xì)胞侵襲能力降低(P<0.05)(圖5)。圖2各組細(xì)胞FTase、HRAS蛋白的表達(dá)

圖2各組細(xì)胞FTase、HRAS蛋白的表達(dá)

圖1各組細(xì)胞FTase、HRASmRNA的表達(dá)2.5各組細(xì)胞的遷移能力

圖3CAL27細(xì)胞轉(zhuǎn)染FTase-siRNA后各組蛋白的表達(dá)

舌鱗狀細(xì)胞癌是最常見的口腔癌,生長快、浸潤性強(qiáng)、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,是導(dǎo)致舌鱗狀細(xì)胞癌患者死亡率高的重要原因。因此,深入探討其侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制意義重大。RAS家族成員(HRAS、KRAS、NRAS)是人類癌癥中最常見的突變癌基因。亞洲人群口腔癌中以HRAS突變率最高,而西方國家頭頸....

圖4SCC-4細(xì)胞轉(zhuǎn)染FTase-siRNA后各組蛋白的表達(dá)

圖3CAL27細(xì)胞轉(zhuǎn)染FTase-siRNA后各組蛋白的表達(dá)Ras蛋白必須通過翻譯后修飾與細(xì)胞膜結(jié)合,才能獲得其致癌活性。1995年Kohl等[26]動物研究表明,在HRAS突變的轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺和唾液腺腫瘤中應(yīng)用FTase抑制劑可抑制腫瘤的生長。另有研究[27]表明,....

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