本文關(guān)鍵詞：牙胚細胞與BMP4轉(zhuǎn)染的BMSCs相互誘導(dǎo)的體外實驗研究

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【摘要】：目的：構(gòu)建骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)慢病毒載體,檢測其對鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)增殖活性和成牙潛能的影響,探討牙胚細胞及骨形態(tài)發(fā)生蛋白4轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞的相互間的成牙誘導(dǎo)作用,以期為組織工程牙篩選種子細胞。方法：從成熟人胎盤組織提取RNA后,RT-PCR擴增BMP4基因,連接至plenti6/v5-D-TOPO表達載體,構(gòu)建出BMP4-plenti6/v5-D-TOPO重組慢病毒表達載體；轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,用MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞的增殖活性,并將骨髓間充質(zhì)干細胞和BMP4轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞分別與SD大鼠牙胚細胞按1：1比例混合培養(yǎng),同時將細胞分為五組,BMSCs組、BMP4/BMSCs組、牙胚細胞組、BMSCs/牙胚細胞組(混合組1)、BMP4/BMSCs/牙胚細胞組(混合組2),分別采用實時熒光定量PCR和Western-blotting檢測五組細胞Ⅰ型膠原蛋白、成釉蛋白、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1、同源異型盒基因1成牙相關(guān)基因mRNA水平和蛋白水平相對表達量的變化。結(jié)果：(1)BMP4基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞后,細胞體外增殖活性增強,(2) BMSCs組和BMP4/BMSCs組相比,BMP4/BMSCs組成釉蛋白、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1、同源異型盒基因1mRNA水平和蛋白水平表達量增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),Ⅰ型膠原蛋白mRNA水平差異無顯著性意義(P0.05)。(3)混合組1和混合組2相比,混合組2Ⅰ型膠原蛋白、成釉蛋白(AMBN)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP1)、同源異型盒基因1 (Dlxl)mRNA水平和蛋白水平表達量增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：BMP4可提高骨髓間充質(zhì)干細胞體外增殖活性和牙向分化能力,牙胚細胞與BMP4轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng),促進了成牙相關(guān)基因的表達,可作為組織工程牙的備選種子細胞。
【關(guān)鍵詞】：骨形態(tài)發(fā)生蛋4 骨髓間充質(zhì)干細胞 牙胚細胞 實時熒光定量PCR Western-blotting
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-21
• 1 實驗材料12-13
• 2 實驗方13-19
• 2.1 構(gòu)建BMP4-pMD 19-T-Vector轉(zhuǎn)移載體13-16
• 2.2 構(gòu)建BMP4-plenti6/v5-D-TOPO慢病毒表達載體16-17
• 2.3 構(gòu)建RFP-plenti6/v5-D-TOPO慢病毒表達載體17
• 2.4 BMP4慢病奉載體轉(zhuǎn)染SD大鼠骨間充質(zhì)干細胞17
• 2.5 MTT細胞增殖活性檢測17-18
• 2.6 細胞分組培養(yǎng)觀察18
• 2.7 實時熒光定量PCR18-19
• 2.8 Western-blotting19
• 3 統(tǒng)計方法19-20
• 4 技術(shù)路線20-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-29
• 小結(jié)29-30
• 致謝30-31
• 參考文獻31-34
• 綜述34-41
• 參考文獻38-41
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文41-42
• 導(dǎo)師評閱表42

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