本文關鍵詞：益生性唾液乳桿菌的篩選及其抑菌物質和粘附作用的初步探究

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【摘要】：目的:本研究旨在從健康人群口腔中篩選具有益生潛能的唾液乳酸桿菌,為益生菌用于口腔疾病的防治做出初步探究。方法:1.取身體健康且無口腔疾病的志愿者的非刺激性唾液并使用LBS固體培養(yǎng)基進行選擇性培養(yǎng),篩選得到乳白色圓形菌落,分別挑取形狀大小不一的各菌落進行單克隆培養(yǎng),經革蘭染色鑒定、16srDNA測序、NCBI((National Center for Biotechnology Information)對比分析得到唾液乳桿菌菌株(Lactobacillus salivarius),將純化后的唾液乳酸桿菌菌株在液體MRS培養(yǎng)基中液體培養(yǎng),取其無菌發(fā)酵液上清對指示菌變形鏈球菌(streptococcus mutans,SM)UA159進行抑制實驗,篩選出抑菌效果最顯著的菌株作為本實驗的目標菌株并命名。2.取目標菌株的無菌發(fā)酵液上清進行抑菌物質的有效抑菌濃度、對熱的穩(wěn)定性、對蛋白酶的敏感性以及抑菌物質的廣譜性等多方面的分析。3.以變形鏈球菌UA159為指示菌,將其與目標菌株以不同的濃度在蓋玻片上共培養(yǎng)48h,光學顯微鏡及掃描電鏡下觀察其粘附狀況,初步研究目標菌株與變形鏈球菌UA159的體外粘附能力。結果:1.本實驗成功篩選出4株具有不同基因型的唾液乳酸桿菌,其對變形鏈球菌UA159有著不同的抑制作用,將抑菌作用最強的唾液乳酸桿菌菌株作為目標菌株并命名為w22a。2.(1)w22a無菌發(fā)酵液上清中的抑菌物質被稀釋至原濃度的1/3時其抑菌作用不太明顯,抑菌圈直徑與空白對照組相比無統(tǒng)計學差異(P0.05),但隨著發(fā)酵上清液中抑菌物質濃度的增加其抑菌作用開始增強。(2)將無菌發(fā)酵液上清進行60℃-90℃梯度溫度處理后發(fā)現(xiàn)其對變形鏈球菌UA159的抑制作用未受影響,各組間無顯著性差異(P0.05)。(3)將無菌發(fā)酵上清液經過氧化氫酶及多種廣譜蛋白酶處理后發(fā)現(xiàn)抑菌物質的抑菌作用出現(xiàn)了不同程度的破壞,其中蛋白酶K的破壞作用最強。(4)無菌發(fā)酵液上清中的抑菌物質對金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌DH5α、白色念珠菌ATCC10231、嗜酸乳桿菌ATCC4356等口腔常見的致病菌有著程度不一的抑制作用(P0.01),其中抑菌物質對大腸桿菌DH5α的抑制作用最為顯著。3與變形鏈球菌UA159相比,w22a在體外模擬實驗中有著更高的粘附率,并在一定濃度時能夠抑制變形鏈球菌的生長。結論:本研究從健康人群唾液中成功篩選出具有口腔益生潛能的唾液乳酸桿菌w22a。其產出的抑菌物質對熱穩(wěn)定,對多種廣譜蛋白酶敏感并能夠對多種口腔常見致病菌有著不同的抑制作用。另外,w22a來源于口腔,能夠對口腔環(huán)境有著良好的適應性。因此,其是一株有口腔益生潛能的唾液乳桿菌,具有一定的研究價值及應用前景。
【關鍵詞】：唾液 唾液乳酸桿菌 抑菌物質 粘附 益生性
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 研究內容及目的12-13
• 2.1 研究目的12
• 2.2 研究內容12-13
• 第三章 材料和方法13-22
• 3.1 實驗材料13-16
• 3.1.1 主要儀器和設備13-14
• 3.1.2 主要試劑：14-16
• 3.2 實驗方法16-21
• 3.2.1 乳酸桿菌的篩選及培養(yǎng)16
• 3.2.2 唾液乳酸桿菌的篩選及鑒定16-18
• 3.2.3 唾液乳酸桿菌的對變形鏈球菌UA159的抑制實驗18-19
• 3.2.4 目標菌株生長曲線及抑菌物質有效抑菌抑菌濃度的測定19
• 3.2.5 目標菌株發(fā)酵上清液中抑菌物質特性的初步探究19-20
• 3.2.6 目標菌株與變形鏈球菌體外粘附實驗的研究20-21
• 3.3 統(tǒng)計學方法21-22
• 第四章 研究結果22-29
• 4.1 益生性唾液乳酸桿菌的篩選結果22-23
• 4.1.1 唾液乳酸桿菌的篩選結果22-23
• 4.1.2 唾液乳酸桿菌對變形鏈球菌UA159抑制能力的測定23
• 4.2 目標菌株所產抑菌物質的初步研究及分析23-27
• 4.2.1 目標菌株生長曲線及代謝產物有效抑菌濃度的測定23-24
• 4.2.2 目標菌株所產抑菌物質基本特性的初步研究24-27
• 4.3 W22A與UA159體外粘附實驗結果27-29
• 第五章 討論29-35
• 5.1 益生性唾液乳酸桿菌的篩選29-30
• 5.2 抑菌物質的初步研究30-32
• 5.3 W22A與UA159的體外粘附實驗32-33
• 5.4 關于本實驗的幾點思考及展望33-35
• 第六章 結論35-36
• 參考 文獻36-41
• 中英文縮略詞對照表41-42
• 攻讀學位期間的學術研究成果42-43
• 一、在學期間發(fā)表論文42
• 二、參與課題的項目名稱42-43
• 致謝43

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本文編號：559439