本文關鍵詞：Wnt5a敲除小鼠上顎板發(fā)育異常的機制

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【摘要】：腭裂是常見的一種由于上顎板發(fā)育缺陷而導致的先天性畸形。Wnt信號通路在上顎板的正常發(fā)育過程中具有重要的作用。Wnt5a是Wnt家族的一員,可以激活經典Wnt信號；也可以抑制經典Wnt信號,同時激活非經典Wnt信號。前人研究表明,Wnt5a表達缺失會造成腭裂。因此本實驗將利用Wnt5a敲除小鼠,進一步探究在上腭板發(fā)育過程中,Wnt5a是否調控經典Wnt和BMP信號通路,以及篩選Wnt5a調控的下游靶基因,更加闡明Wnt5a在上腭板發(fā)育中的調控機制。首先,收取E14.5天TOP-gal小鼠(經典Wnt信號通路的報告小鼠)的上腭板,X-Gal染色后發(fā)現,經典Wnt信號處于未激活狀態(tài)。然后將E14.5天的Wnt5a-/-';TOP-gal小鼠上腭板進行X-Gal染色,發(fā)現前后端均無X-Gal染色的陽性信號,表明Wnt5a的表達缺失并不能上調Wnt經典信號表達。其次,在顱面部的器官發(fā)育中,Wnt與BMP信號通路不僅具有表達上的重合,而且兩者之間還相互調控。收取E13.5天的BRE-LacZ小鼠(經典BMP信號通路報告小鼠)上顎板X-Gal染色后發(fā)現,經典BMP信號在前端處于未激活狀態(tài)(X-Gal染色陰性),而在后端大量激活。然后將E13.5天的Wnt5a-/-;BRE-LacZ小鼠上腭板進行X-Gal染色,發(fā)現其染色結果與BRE-LacZ小鼠并無差異,表明Wnt5a的表達缺失并不能激活BMP經典信號表達。最終,為了探究在上腭板中Wnt5a所調控的差異基因,然后收取小鼠的上腭板前后端組織,進行基因芯片分析。結果顯示,Wnt5a缺失之后,AP1(activator protein1)基因家族成員Fos、Fosb、Junb、Jun和參與細胞骨架調控的Cfll等基因表達水平大幅提高。進一步利用real-time PCR進行驗證基因芯片結果。然后用羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽對上腭板前后端間充質細胞的細胞骨架進行染色。結果表明,在前后端間充質細胞中,Wnt5a表達缺失造成了細胞骨架紊亂。綜上所述,在上腭板發(fā)育早期,Wnt5a不調控Wnt和BMP經典信號通路；Wnt5a的表達缺失上調AP1家族相關基因表達,進而造成細胞骨架紊亂,導致上腭板不能正常閉合,發(fā)生腭裂。
【關鍵詞】：腭裂 Wnt經典信號 Wnt5a 細胞骨架
【學位授予單位】：福建師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R782.22
【目錄】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-5
• 中文文摘5-11
• 緒論11-21
• 一、哺乳動物上顎板的發(fā)育過程11-12
• 二、哺乳動物上顎板發(fā)育的分子學機制12-16
• 1、Shh信號分子12-13
• 2、BMPs信號分子13-14
• 3、TGF-β信號通路14-15
• 4、FGF信號分子15-16
• 三. Wnt信號通路在小鼠上顎板發(fā)育過程中的調控作用16-17
• 四. 非經典Wnt信號對細胞骨架以及細胞極性遷移的調控作用17-19
• 五. 轉基因小鼠在研究上顎板發(fā)育領域中的應用19-20
• 六. 本研究的目的和意義20-21
• 第一章 材料與方法21-35
• 1.1 實驗材料21-26
• 1.2 實驗方法26-35
• 第二章 實驗結果與分析35-45
• 2.1 Wnt5a~(-/-)小鼠次級腭裂的可靠性驗證35
• 2.2 Wnt5a的表達缺失對Wnt經典信號表達的影響35-37
• 2.3 Wnt5a的表達缺失對BMP經典信號表達的影響37-39
• 2.4 上顎板間充質中Wnt5a缺失對細胞骨架的影響39-45
• 第三章 討論45-51
• 3.1 Wnt5a缺失小鼠上顎板發(fā)生腭裂45
• 3.2 上顎板間充質中Wnt5a不對經典Wnt信號通路起調控作用45-46
• 3.3 上顎板間充質中Wnt5a不對經典BMP信號通路起調控作用46-47
• 3.4 上顎板間充質細胞中Wnt5a表達缺失引起AP1家族基因上調導致細胞骨架紊亂47-51
• 第四章 結論51-53
• 參考文獻53-61
• 攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果61-63
• 致謝63-65
• 個人簡歷65-67

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