本文關(guān)鍵詞：靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響研究

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【摘要】：[目的] 建立靜磁場作用下SD乳鼠原代下頜髁突軟骨細(xì)胞(mandibular condylar chondrocyte,MCC)和鼻中隔軟骨細(xì)胞(nasal septal chondrocyte,NSC)體外培養(yǎng)模型,觀察靜磁場對髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及差異,為后續(xù)深入研究靜磁場對髁突軟骨和鼻中隔軟骨形成過程的影響提供指導(dǎo),為進(jìn)一步研究靜磁場對頜面部生長發(fā)育的影響提供理論基礎(chǔ)。[方法]取出生1-3天的SD乳鼠髁突軟骨和鼻中隔軟骨,用機(jī)械分離和酶聯(lián)消化法獲取原代細(xì)胞,在相同培養(yǎng)條件下進(jìn)行原代培養(yǎng)和鑒定。分別加載強(qiáng)度為160mT、280mT、360mT的靜磁場,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長狀況。通過觀測磁場對髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞貼壁生長的影響,并且采用MTT(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)比色法篩選出最佳磁場強(qiáng)度。使用免疫組化染色檢測兩種軟骨細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原(Type Ⅱ collagen, Col Ⅱ)表達(dá)的差異。通過甲苯胺藍(lán)染色法檢測細(xì)胞外基質(zhì)中糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG)的含量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測加載磁場后兩種軟骨細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅱ型膠原(type Ⅱ collagen, Co Ⅲ)和聚集蛋白多糖(AGG, aggrecan) mRNA的表達(dá)。探討靜磁場對體外培養(yǎng)髁突和鼻中隔軟骨細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)功能的影響。[結(jié)果]采用相同的消化方式及培養(yǎng)條件成功培養(yǎng)出原代髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞,在細(xì)胞大部分貼壁后,加載磁場繼續(xù)培養(yǎng)。分別加載160mT、280mT、360mT的靜磁場,通過觀察細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況,采用MTT比色法選取細(xì)胞增殖最多以及細(xì)胞生長良好的磁場強(qiáng)度280mT為最佳磁場強(qiáng)度,并作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的磁場強(qiáng)度。同時(shí)設(shè)置對照組,四組軟骨細(xì)胞在第3天、5天、8天時(shí)進(jìn)行Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍(lán)染色,染色結(jié)果均呈陽性,兩種細(xì)胞加載磁場組均較空白組陽性率高。相同時(shí)間點(diǎn),兩種染色中鼻中隔軟骨細(xì)胞陽性表達(dá)均高于髁突軟骨細(xì)胞。兩種軟骨細(xì)胞在培養(yǎng)第3天、5天、8天時(shí)對細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅱ型膠原和AGG的mRNA表達(dá)進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)四組軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和AGGmRNA的表達(dá)量均隨細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的增加而有所增高,兩種細(xì)胞加載磁場組均較空白組表達(dá)量多,相同時(shí)間點(diǎn)鼻中隔軟骨細(xì)胞合成Ⅱ型膠原、AGG的能力均高于髁突軟骨細(xì)胞。[結(jié)論]1.本實(shí)驗(yàn)成功建立靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究模型。2.160mT、280mT、360mT三個(gè)磁場強(qiáng)度均可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖,且280mT對兩種軟骨細(xì)胞的促進(jìn)增殖作用最為明顯,細(xì)胞生長狀況良好,選定280mT為最佳磁場強(qiáng)度。3.加載靜磁場后髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和AGG mRNA的表達(dá),GAG的合成變化趨勢基本一致,靜磁場對三者的合成均具有促進(jìn)作用,且鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原、GAG和AGG的表達(dá)量多于髁突軟骨細(xì)胞�？梢酝ㄟ^加載靜磁場影響兩種軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成,從而影響二者的生物學(xué)特性。髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞對靜磁場的反應(yīng)存在差異,這些可能與二者的形成機(jī)制及生物學(xué)特性密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：髁突軟骨細(xì)胞 鼻中隔軟骨細(xì)胞 靜磁場 Ⅱ型膠原 糖胺聚糖 聚集蛋白多糖
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-13
• 第一部分 SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞磁場加載模型的建立13-27
• 材料13-15
• 方法15-16
• 結(jié)果16-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25-27
• 第二部分 靜磁場作用下SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的變化27-40
• 材料27-28
• 方法28-29
• 結(jié)果29-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-40
• 第三部分 靜磁場作用下SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原、AGG的表達(dá)差異40-50
• 材料41
• 方法41-43
• 結(jié)果43-47
• 討論47-49
• 結(jié)論49-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 文獻(xiàn)綜述56-61
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 發(fā)表綜述61-67
• 參考文獻(xiàn)64-67
• 致謝67

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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7 秦臘梅,肖永華,周麗珍,郝瑞福,牛福玲,姜良鐸;4味中藥對體外培養(yǎng)成骨樣細(xì)胞增殖的影響——對通補(bǔ)強(qiáng)骨方中主要組成藥物的研究[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2002年02期

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本文編號：541182