發(fā)布時間：2017-07-14 13:08

  本文關(guān)鍵詞：靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響研究

  更多相關(guān)文章： 髁突軟骨細(xì)胞 鼻中隔軟骨細(xì)胞 靜磁場 Ⅱ型膠原 糖胺聚糖 聚集蛋白多糖

【摘要】：[目的] 建立靜磁場作用下SD乳鼠原代下頜髁突軟骨細(xì)胞(mandibular condylar chondrocyte,MCC)和鼻中隔軟骨細(xì)胞(nasal septal chondrocyte,NSC)體外培養(yǎng)模型,觀察靜磁場對髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及差異,為后續(xù)深入研究靜磁場對髁突軟骨和鼻中隔軟骨形成過程的影響提供指導(dǎo),為進一步研究靜磁場對頜面部生長發(fā)育的影響提供理論基礎(chǔ)。[方法]取出生1-3天的SD乳鼠髁突軟骨和鼻中隔軟骨,用機械分離和酶聯(lián)消化法獲取原代細(xì)胞,在相同培養(yǎng)條件下進行原代培養(yǎng)和鑒定。分別加載強度為160mT、280mT、360mT的靜磁場,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長狀況。通過觀測磁場對髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞貼壁生長的影響,并且采用MTT(Methyl Thiazolyl Tetrazolium, MTT)比色法篩選出最佳磁場強度。使用免疫組化染色檢測兩種軟骨細(xì)胞基質(zhì)內(nèi)Ⅱ型膠原(Type Ⅱ collagen, Col Ⅱ)表達的差異。通過甲苯胺藍(lán)染色法檢測細(xì)胞外基質(zhì)中糖胺聚糖(glycosaminoglycan, GAG)的含量。實時熒光定量PCR (real time quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)方法檢測加載磁場后兩種軟骨細(xì)胞外基質(zhì)中Ⅱ型膠原(type Ⅱ collagen, Co Ⅲ)和聚集蛋白多糖(AGG, aggrecan) mRNA的表達。探討靜磁場對體外培養(yǎng)髁突和鼻中隔軟骨細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)功能的影響。[結(jié)果]采用相同的消化方式及培養(yǎng)條件成功培養(yǎng)出原代髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞,在細(xì)胞大部分貼壁后,加載磁場繼續(xù)培養(yǎng)。分別加載160mT、280mT、360mT的靜磁場,通過觀察細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況,采用MTT比色法選取細(xì)胞增殖最多以及細(xì)胞生長良好的磁場強度280mT為最佳磁場強度,并作為后續(xù)實驗的磁場強度。同時設(shè)置對照組,四組軟骨細(xì)胞在第3天、5天、8天時進行Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍(lán)染色,染色結(jié)果均呈陽性,兩種細(xì)胞加載磁場組均較空白組陽性率高。相同時間點,兩種染色中鼻中隔軟骨細(xì)胞陽性表達均高于髁突軟骨細(xì)胞。兩種軟骨細(xì)胞在培養(yǎng)第3天、5天、8天時對細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅱ型膠原和AGG的mRNA表達進行檢測,發(fā)現(xiàn)四組軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和AGGmRNA的表達量均隨細(xì)胞培養(yǎng)時間的增加而有所增高,兩種細(xì)胞加載磁場組均較空白組表達量多,相同時間點鼻中隔軟骨細(xì)胞合成Ⅱ型膠原、AGG的能力均高于髁突軟骨細(xì)胞。[結(jié)論]1.本實驗成功建立靜磁場對SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究模型。2.160mT、280mT、360mT三個磁場強度均可以促進軟骨細(xì)胞的增殖,且280mT對兩種軟骨細(xì)胞的促進增殖作用最為明顯,細(xì)胞生長狀況良好,選定280mT為最佳磁場強度。3.加載靜磁場后髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和AGG mRNA的表達,GAG的合成變化趨勢基本一致,靜磁場對三者的合成均具有促進作用,且鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原、GAG和AGG的表達量多于髁突軟骨細(xì)胞�？梢酝ㄟ^加載靜磁場影響兩種軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的合成,從而影響二者的生物學(xué)特性。髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞對靜磁場的反應(yīng)存在差異,這些可能與二者的形成機制及生物學(xué)特性密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：髁突軟骨細(xì)胞 鼻中隔軟骨細(xì)胞 靜磁場 Ⅱ型膠原 糖胺聚糖 聚集蛋白多糖
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-13
• 第一部分 SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞磁場加載模型的建立13-27
• 材料13-15
• 方法15-16
• 結(jié)果16-23
• 討論23-25
• 結(jié)論25-27
• 第二部分 靜磁場作用下SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的變化27-40
• 材料27-28
• 方法28-29
• 結(jié)果29-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-40
• 第三部分 靜磁場作用下SD乳鼠髁突軟骨細(xì)胞和鼻中隔軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原、AGG的表達差異40-50
• 材料41
• 方法41-43
• 結(jié)果43-47
• 討論47-49
• 結(jié)論49-50
• 全文總結(jié)50-51
• 參考文獻51-56
• 文獻綜述56-61
• 參考文獻58-61
• 發(fā)表綜述61-67
• 參考文獻64-67
• 致謝67

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 秦臘梅,肖永華,牛福玲,王碩仁,葉文華,姜良鐸;三仙湯對成骨細(xì)胞增殖的影響[J];中國臨床康復(fù);2002年07期

2 劉岳強;劉開泰;楊曉燕;鐘近潔;許永華;張東輝;周婷婷;;乳鼠成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)[J];中國實驗動物學(xué)報;2007年03期

3 卓麗玲;顧建紅;趙瑞英;劉宗平;張春嶺;;乳鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2007年10期

4 邵敏;張百擋;梁祖建;黃杰文;;骨質(zhì)疏松人成骨細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)與鑒定[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2010年02期

5 張西正,康少華,匡震邦,蔡紹皙,王遠(yuǎn)亮,徐世榮,黃豈平;單向循環(huán)拉伸應(yīng)變作用下成骨細(xì)胞動力學(xué)響應(yīng)的實驗研究[J];中華創(chuàng)傷雜志;2001年04期

6 梁愛燕;王大為;;稀土永磁體在正畸中的研究及應(yīng)用進展[J];中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志(電子版);2009年06期

7 秦臘梅,肖永華,周麗珍,郝瑞福,牛福玲,姜良鐸;4味中藥對體外培養(yǎng)成骨樣細(xì)胞增殖的影響——對通補強骨方中主要組成藥物的研究[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2002年02期

8 張西正,匡震邦,蔡紹皙,王遠(yuǎn)亮,徐世榮,黃豈平;Wistar大鼠成骨細(xì)胞粘彈性與相對增殖指數(shù)關(guān)系的實驗研究[J];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報;2001年04期

9 李素華;郭定宗;黎兵;趙圣;楊世錦;尹紅斌;向金梅;;新生奶牛成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)、鑒定及生物特性[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2008年09期

，

本文編號：541182