本文關(guān)鍵詞：堿性成纖維細(xì)胞因子對(duì)牙髓干細(xì)胞礦化能力影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人口腔內(nèi)成體干細(xì)胞包括牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells，hDPSCs)、牙周膜干細(xì)胞（human periodontal ligament stem cells，hPDLSCs）、根尖牙乳頭干細(xì)胞（Stem cells from the apical papilla，SCAP）等。牙髓干細(xì)胞具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能，可增殖分化為各種不同種類的功能細(xì)胞。目前，在牙髓再生領(lǐng)域，hDPSCs是人們研究的熱點(diǎn)，它不僅在體外可以分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞，還可以分化為脂肪細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞等，而且還可以在體內(nèi)形成牙髓樣的疏松結(jié)締組織。因此，hDPSCs的體外培養(yǎng)可以作為研究牙髓生物學(xué)的體外模型，在牙髓再生的組織工程學(xué)應(yīng)用中具有廣闊前景。 目前，雖然許多的體內(nèi)研究已經(jīng)證實(shí)bFGF能夠促進(jìn)骨的再生［1-3］。但是，關(guān)于bFGF對(duì)細(xì)胞礦化能力影響的體外研究中卻存在著許多爭議。另外，在bFGF對(duì)hDPSCs刺激的體外研究中同樣也存在類似的爭議，有的研究表明bFGF能促進(jìn)hDPSCs產(chǎn)生堿性磷酸酶［4］，也有實(shí)驗(yàn)表明bFGF會(huì)抑制hDPSCs的礦化能力［5］。眾所周知，反應(yīng)性牙本質(zhì)和第三期牙本質(zhì)的形成是牙齒損傷修復(fù)的重要機(jī)制，而在其形成過程中，hDPSCs的礦化能力起著決定性的作用。所以弄清楚bFGF對(duì)hDPSCs的礦化能力的影響及其作用機(jī)制，對(duì)牙齒損傷修復(fù)的研究有著重要的科研和臨床意義。 本實(shí)驗(yàn)以hDPSCs作為種子細(xì)胞，，在體外條件下，通過細(xì)化bFGF對(duì)hDPSCs的刺激條件，來觀察bFGF對(duì)hDPSCs礦化能力的影響，從而進(jìn)一步明確bFGF對(duì)hDPSCs礦化能力的調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，我們選擇MAPK通路，來研究MAPK通路在bFGF對(duì)hDPSCs作用中的信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制，這將為進(jìn)一步研究hDPSCs的成牙本質(zhì)細(xì)胞分化機(jī)制，以及在牙齒再生研究中hDPSCs的組織工程應(yīng)用等提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為將來hDPSCs的臨床應(yīng)用提供新的思路和途徑。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1. hDPSCs的分離、培養(yǎng)及鑒定 通過經(jīng)典的酶消化法分離出原代hDPSCs，用有限稀釋技術(shù)挑選出單克隆，并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對(duì)hDPSCs的表面標(biāo)記物進(jìn)行了鑒定，證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞為hDPSCs。同時(shí)，進(jìn)行了多向分化能力的鑒定，通過體外誘導(dǎo)，使hDPSCs分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，證實(shí)了所培養(yǎng)細(xì)胞具有多向分化潛能。 2. bFGF對(duì)hDPSCs體外礦化能力的影響 通過設(shè)定不同的培養(yǎng)條件，來觀察bFGF對(duì)hDPSCs體外礦化能力的影響，以茜素紅定量的方法來檢查不同組別的礦化能力。實(shí)驗(yàn)顯示，bFGF在hDPSCs的礦化階段可以抑制其礦化能力，而在細(xì)胞增殖階段，用bFGF刺激hDPSCs，隨著培養(yǎng)時(shí)間的不同也會(huì)有不同的結(jié)果。bFGF刺激一周，hDPSCs的礦化能力增強(qiáng)，刺激兩周，其礦化能力減弱。同時(shí)，bFGF刺激后hDPSCs礦化能力的改變，可以隨著傳代而延續(xù)。 3.MAPKs信號(hào)通路在bFGF刺激hDPSCs作用的初步探討 bFGF刺激hDPSCs后，可以迅速的激活ERK，P38和JNK通路，三個(gè)蛋白的磷酸化水平均明顯升高，而且對(duì)ERK的激活尤為迅速。在用抑制劑抑制ERK，P38和JNK通路后，bFGF的刺激并不能使P38和JNK的磷酸化水平升高，而ERK的磷酸化水平卻仍然升高，但比不用抑制劑時(shí)要低。而對(duì)于干細(xì)胞基因Nanog，OCT4、SOX2的影響方面，bFGF刺激hDPSCs后，三種干細(xì)胞基因的表達(dá)水平都明顯升高。當(dāng)P38和JNK通路被抑制后再用bFGF刺激hDPSCs，三種干細(xì)胞基因的表達(dá)比陽性對(duì)照組都相應(yīng)下調(diào)，但是當(dāng)ERK被抑制后再用bFGF刺激hDPSCs，雖然Nanog，OCT4的表達(dá)下調(diào)，但SOX2的表達(dá)卻明顯上調(diào)。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)說明，除了MAPK通路外，還有其他通路參與了bFGF刺激后hDPSCs的細(xì)胞生物學(xué)變化的調(diào)控。 綜上所述，bFGF對(duì)hDPSCs的成骨分化有很重要的影響，在細(xì)胞的不同階段給以bFGF的刺激對(duì)成骨分化可以產(chǎn)生不同的影響。bFGF可以激活hDPSCs的MAPK通路，但是MAPK通路不是調(diào)節(jié)hDPSCs生物學(xué)改變的唯一通路，還有其他旁路參與其中。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步研究hDPSCs的分化機(jī)制提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，同時(shí)為牙齒再生的組織工程研究提供了新的思路和途徑。
【關(guān)鍵詞】：牙髓干細(xì)胞 堿性成纖維細(xì)胞生長因子 礦化 MAPK
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R780.2
【目錄】：

• 縮略語表6-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-27
• 第一部分 人牙髓干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定27-38
• 實(shí)驗(yàn)一 人牙髓干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)27
• 1 材料與方法27-32
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-30
• 3 討論30-32
• 實(shí)驗(yàn)二 hDPSCs的鑒定32-38
• 1 材料與方法32-34
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-36
• 3 討論36-38
• 第二部分 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對(duì)牙髓干細(xì)胞成骨分化作用的體外研究38-50
• 實(shí)驗(yàn)一 不同培養(yǎng)條件下bFGF對(duì)hDPSCs體外礦化能力的影響38-47
• 1 材料和方法39-40
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-45
• 3 討論45-47
• 實(shí)驗(yàn)二 不同培養(yǎng)條件下bFGF對(duì)hDPSCsALP活性的影響47-50
• 1 材料和方法47-48
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-49
• 3 討論49-50
• 第三部分 堿性成纖維細(xì)胞生長因子對(duì)牙髓干細(xì)胞作用機(jī)制的初步研究50-66
• 實(shí)驗(yàn)一 bFGF對(duì)hDPSCs作用中MAPKs信號(hào)通路的研究50-57
• 1 材料與方法51-52
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果52-55
• 3 討論55-57
• 實(shí)驗(yàn)二 MAPKs通路在bFGF對(duì)hDPSCs分化影響中的作用57-66
• 1 材料與方法57-59
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-63
• 3 討論63-66
• 全文總結(jié)66-68
• 參考文獻(xiàn)68-76
• 個(gè)人簡歷和研究成果76-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號(hào)：407484