目的:群體感應（Quorum Sensing,QS）是指細菌通過感知菌群密度變化來調(diào)控自身重要基因表達的群體行為。N-（3-氧代十二烷�；�-L-高絲氨酸內(nèi)酯(N-（3-oxododecanoyl）-L-homoserine lactone,AHL)是最具代表性的一類群體感應分子,由銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa,P.a）分泌。研究指出AHL對宿主細胞具有非常廣泛的生物學調(diào)節(jié)作用。例如,AHL可通過損傷細胞線粒體或激活膜表面死亡受體來誘導細胞凋亡;AHL還有廣泛的免疫調(diào)節(jié)功能諸如破壞上皮細胞連接、誘導免疫細胞趨化、激活核因子-κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）介導的炎癥反應。另一方面,口腔內(nèi)存在多種細菌,通常情況下菌群之間相互平衡維持的共生關系并不致病,但在某些重癥牙周炎和持續(xù)性根尖周病等以骨缺損為主要癥狀的口腔疾病中,機會致病菌P.a會被特征性的檢出,且有學者提出牙周主要致病菌合并P.a感染顯著增加了牙周病的炎癥和骨破壞的程度,因此,P.a與骨損傷之間可能存在因果關系。此外,P.a常以生物膜的形式存在,有研究指出,AHL在P.a...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:AHL對成骨細胞凋亡的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 AHL細胞培養(yǎng)液的配制及細胞處理
            2.2.3 細胞狀態(tài)觀察
            2.2.4 細胞活性測定
            2.2.5 TUNEL細胞凋亡檢測
            2.2.6 蛋白提取及Western blotting
            2.2.7 線粒體膜電位去極化測定
            2.2.8 細胞熒光染色
            2.2.9 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 AHL抑制成骨細胞活性
        3.2 AHL誘導成骨細胞凋亡
        3.3 AHL誘導成骨細胞表達Cleaved-Caspase-3及Cleaved-PARP
        3.4 AHL在成骨細胞線粒體中的熒光共定位
        3.5 AHL導致成骨細胞線粒體膜電位去極化
        3.6 AHL誘導細胞色素c由線粒體內(nèi)異位至細胞質(zhì)中
    4 討論
    5 結論
第二部分:AHL對成骨細胞分化的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 ALP染色
            2.2.2 ALP活性測定
            2.2.3 茜素紅染色
            2.2.4 RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 AHL對成骨細胞狀態(tài)的影響
        3.2 AHL對成骨細胞ALP染色和ALP活性的影響
        3.3 AHL對成骨細胞鈣化結節(jié)形成的影響
        3.4 AHL對成骨分化標志基因表達的調(diào)控
    4 討論
    5 結論
第三部分:AHL調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子釋放模式影響成骨細胞凋亡和分化
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 儀器設備
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞熒光染色
            2.2.2 胞內(nèi)Ca²⁺測定
            2.2.3 蛋白提取及Western blotting
            2.2.4 ALP染色、ALP活性及RNA的提取和Real-time PCR
            2.2.5 統(tǒng)計分析
    3 結果
        3.1 AHL募集于成骨細胞ER并促進胞內(nèi)Ca²⁺釋放
            3.1.1 AHL在成骨細胞ER中的熒光共定位
            3.1.2 AHL誘導成骨細胞胞內(nèi)Ca²⁺釋放
        3.2 改變胞內(nèi)Ca²⁺釋放模式抑制AHL誘導的成骨細胞凋亡并部分恢復成骨細胞分化
            3.2.1 W7 改變AHL誘導下成骨細胞胞內(nèi)Ca²⁺的釋放模式
            3.2.2 W7抑制AHL誘導的成骨細胞凋亡
            3.2.3 W7部分解除了AHL對成骨細胞分化的抑制作用
    4 討論
    5 結論
本研究創(chuàng)新型的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4045572