目的： 應用酶消化法培養(yǎng)獲得人脫落乳牙牙髓干細胞,并進行分離、純化和鑒定,采用維生素C誘導法形成人脫落乳牙牙髓干細胞膜片,探討其體外骨向分化能力,為人脫落乳牙牙髓干細胞膜片臨床應用打下臨床前期實驗基礎。 方法： 1.人脫落乳牙牙髓干細胞的原代培養(yǎng)、分離純化、鑒定。 選取6-10歲健康兒童因滯留而拔除的乳牙,采用酶消化法獲得單細胞懸液,有限稀釋法進行分離、純化,獲得人脫落乳牙牙髓干細胞。測定細胞克隆形成率,倒置顯微鏡下逐日觀察細胞的生長狀態(tài)及細胞倍增能力。流式細胞儀檢測分析其表面抗原CD146、CD90、SSEA-4、OCT-4等的表達情況。取生長狀況良好的第三代人脫落乳牙牙髓干細胞,進行成骨和成脂誘導,觀察細胞形態(tài)變化,分別行堿性磷酸酶染色、茜素紅染色和油紅O染色,檢測成骨分化和成脂分化情況,鑒定其多向分化能力。 2.維生素C誘導人脫落乳牙牙髓干細胞膜片的形成及成骨分化能力檢測 將第3代人脫落乳牙牙髓干細胞,在含20、50、80、100μg/ml維生素C α-MEM培養(yǎng)液下誘導培養(yǎng)10-14天,以獲得能誘導形成完整的、連續(xù)的人脫落乳牙牙髓干細胞膜片的合適的維生素C...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、人脫落乳牙牙髓干細胞原代培養(yǎng)、分離純化、鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 組織的獲得
        1.1.2 實驗試劑及設備
        1.1.3 人脫落乳牙牙髓干細胞原代培養(yǎng)收集
        1.1.4 有限稀釋法分離純化人脫落乳牙牙髓干細胞
        1.1.5 細胞形態(tài)學觀察
        1.1.6 細胞克隆形成率(colony forming units,CFU)的測定
        1.1.7 流式細胞儀表面抗原檢測
        1.1.8 體外成骨分化誘導實驗
        1.1.9 體外成脂誘導實驗
    1.2 結果
        1.2.1 細胞形態(tài)倒置顯微鏡觀察
        1.2.2 細胞形態(tài)HE染色觀察
        1.2.3 人脫落乳牙牙髓干細胞克隆形成率(colony forming units,CFU)
        1.2.4 流式細胞儀表面抗原檢測
        1.2.5 體外成骨分化誘導礦化結節(jié)形成茜素紅染色情況
        1.2.6 體外成骨分化誘導堿性磷酸酶染色結果
        1.2.7 體外成脂誘導油紅-0染色及陽性細胞率
    1.3 討論
    1.4 小結
二、維生素C誘導的人脫落乳牙牙髓干細胞細胞膜片的形成及成骨分化能力檢測
    2.1 對象和方法
        2.1.1 主要的實驗試劑及設備
        2.1.2 維生素C誘導的人脫落乳牙牙髓干細胞細胞膜片的形成
        2. 1.3細胞膜片HE染色觀察
        2.1.4 茜素紅染色
        2.1.5 堿性磷酸酶染色
        2.1.6 半定量RT-PCR檢測Runx2、OCN的表達
    2.2 結果
        2.2.1 細胞膜片培養(yǎng)倒置顯微鏡下觀察
        2.2.2 細胞膜片的獲得
        2.2.3 細胞膜片HE染色觀察
        2.2.4 茜素紅染色
        2.2.5 堿性磷酸酶染色
        2.2.6 半定量RT-PCR檢測Runx-2、OCN的表達
    2.3 討論
    2.4 小結
結論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻
致謝



本文編號：4005461