目的 :探討miR-579-3p對口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)細(xì)胞增殖和凋亡的影響及作用機(jī)制。方法:培養(yǎng)正常人口腔角質(zhì)形成細(xì)胞(normal human oral keratinocyte,NHOK)和OSCC細(xì)胞系CAL27、CAL33、SCC15,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)檢測細(xì)胞中miR-579-3p和肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白3B(actin-related protein 3B,ACTR3B)信使RNA(mRNA)的表達(dá)水平,蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測ACTR3B蛋白表達(dá)水平。以CAL33細(xì)胞為研究對象,構(gòu)建過表達(dá)miR-579-3p或沉默ACTR3B表達(dá)的CAL33細(xì)胞,四甲基噻唑藍(lán)染色法(methylthiazoletrazolium,MTT)檢測細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡,western blot檢測細(xì)胞周期蛋白D1(CyclinD1)和活化的半胱天冬酶-3(C-caspase-3)蛋白水平。Starbase生物信息學(xué)軟件預(yù)測ACTR3...

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圖5Westernblot檢測ACTR3B、CyclinD1、C-caspase-3蛋白表達(dá)

圖4miR-579-3p靶向調(diào)控ACTR3B表達(dá)3討論

圖2過表達(dá)miR-579-3p對CAL33細(xì)胞增殖和凋亡的影響

Starbase軟件預(yù)測顯示，ACTR3B的3′UTR中含有與miR-579-3p互補(bǔ)的核苷酸序列，提示ACTR3B是miR-579-3p的靶基因（圖4）。雙熒光素酶活性檢測結(jié)果顯示，與miR-NC組比較，miR-579-3p組共轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-ACTR3B的熒光素酶活性降低（P<0.....

圖4miR-579-3p靶向調(diào)控ACTR3B表達(dá)

與miR-579-3p+pcDNA-NC組比較，miR-579-3p+pcDNA-ACTR3B組CAL33細(xì)胞存活率和CyclinD1蛋白水平升高（P<0.05），細(xì)胞凋亡率和C-caspase-3蛋白水平降低（P<0.05）。詳見表6和圖5。圖5Westernblot檢測A....

圖1Westernblot檢測ACTR3B蛋白表達(dá)

與NHOK比較，口腔鱗癌細(xì)胞系CAL27、CAL33和SCC15中miR-579-3p表達(dá)水平降低（P<0.05),ACTR3BmRNA和蛋白表達(dá)水平升高（P<0.05）。選擇CAL33細(xì)胞為研究對象，進(jìn)行后續(xù)研究。詳見圖1和表1。2.2過表達(dá)miR-579-3p對口腔鱗癌C....

本文編號：3978506