采用重組法構(gòu)建Ltp1的原核表達(dá)載體,并將其轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中進(jìn)行異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)過(guò)表達(dá),然后用鎳柱層析法粗純化,分子篩細(xì)純化得到目的蛋白,以SDS-PAGE電泳和Western blot分析表達(dá)產(chǎn)物;將目的蛋白和底物對(duì)硝基苯磷酸二鈉顯色反應(yīng)分析其活性。SDS-PAGE結(jié)果顯示有與目的蛋白理論相對(duì)分子質(zhì)量一致的表達(dá)條帶;Western blot分析證實(shí)該蛋白帶有6個(gè)組氨酸(His)標(biāo)簽的目的蛋白,能夠催化磷酸單酯的活性;計(jì)算出米氏常數(shù)(Km)和最大反應(yīng)速率(Vmax)分別為70.4μmol、51.1μmol/(L·min),pH 5.0～6.0催化活性最高,在37～50℃具有較高活性。

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【部分圖文】：

圖8pH檢測(cè)

圖7酶活反應(yīng)圖9溫度檢測(cè)

圖9溫度檢測(cè)

圖8pH檢測(cè)2.5酶活結(jié)果

圖1p29-PG1641菌液PCR后DNA瓊脂糖電泳

圖1為瓊脂糖電泳結(jié)果:從NCBI上得知PG1641目的基因?yàn)?13bp,瓊脂糖電泳結(jié)果與目的基因大小基本一致,在500多bp左右;圖2顯示,質(zhì)�；厥蘸蟓傊请娪窘Y(jié)果也與實(shí)際結(jié)果一致。圖3以生物學(xué)信息軟件ExPAsy軟件生物學(xué)信息軟件分析知Ltp1蛋白PI值約為4.99,理論相對(duì)....

圖2質(zhì)粒回收后瓊脂糖電泳

圖1p29-PG1641菌液PCR后DNA瓊脂糖電泳圖3ExPASy軟件分析結(jié)果

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