目的:研究涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)來源的外泌體(exosome,EXO)對成纖維細胞PD-L1分子表達的影響。方法:通過EXO分離試劑盒提取SACC-83細胞系來源的外泌體并以電鏡鑒定其顆粒大小、密度和表型;使用PKH67熒光標(biāo)記后將EXO與成纖維細胞HPLF共孵育,以共聚焦顯微鏡觀察EXO可否被HPLF細胞攝取;將EXO與HPLF細胞共孵育后,全轉(zhuǎn)錄組測序檢測篩查該細胞中差異表達基因,GO分析結(jié)合KEGG富集分析闡明差異表達基因涉及的生物學(xué)功能和相關(guān)信號通路;使用qPCR、Western blotting和流式細胞術(shù)檢測腫瘤EXO對HPLF細胞中PD-L1、LAG3和IDO1在mRNA與蛋白水平表達的影響。結(jié)果:SACC-83細胞源EXO特異性表達CD63、CD81和TSG101分子,并可被HPLF細胞內(nèi)吞攝取;EXO處理HPLF細胞后,細胞中PD-L1分子顯著上調(diào)表達(Fold change=10.19),差異基因顯著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String等免疫反應(yīng)信號通路;體外實驗證明EXO可以從mR...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑
    1.2 細胞培養(yǎng)與EXO分離和熒光標(biāo)記
    1.3 SACC-83來源EXO的電鏡鑒定
    1.4 共聚焦熒光顯微鏡觀察HPLF細胞對EXO攝取
    1.5 EXO處理后HPLF細胞的全轉(zhuǎn)錄組測序與數(shù)據(jù)分析
    1.6 qPCR檢測EXO處理后HPLF細胞中PD-L1mRNA和LAG3mRNA的表達水平
    1.7 Western blotting檢測EXO處理后HPLF細胞中相關(guān)蛋白的表達水平
    1.8 流式細胞術(shù)檢測EXO處理后HPLF細胞PD-L1表達水平
    1.9 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 SACC-83來源的EXO能夠被成纖維細胞HPLF內(nèi)吞
    2.2 SACC-83來源的EXO對成纖維細胞HPLF生物學(xué)功能和相關(guān)信號通路的影響
    2.3 SACC-83來源的EXO上調(diào)HPLF細胞中PD-L1的表達
3 討論



本文編號：3868553