發(fā)布時(shí)間：2023-11-11 09:04

　　目的通過(guò)重組質(zhì)粒載體,慢病毒包裝轉(zhuǎn)染技術(shù),體外研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)與p53的表達(dá)之間關(guān)系,同時(shí)研究敲低lncRNAp53urlnc對(duì)舌鱗癌細(xì)胞(SCC-3)的影響,為將來(lái)舌鱗癌的治療提供新的思路。方法使用高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)p53誘導(dǎo)上調(diào)系統(tǒng)的H1299細(xì)胞進(jìn)行高通量測(cè)序技術(shù)分析,選取一條受p53誘導(dǎo)上調(diào)倍數(shù)明顯的lncRNA,即lncRNAp53urlnc為研究對(duì)象,構(gòu)建相應(yīng)重組質(zhì)粒載體。培養(yǎng)SCC-3細(xì)胞,在SCC-3細(xì)胞中分別敲低和過(guò)表達(dá)p53后,提取各組RNA和蛋白,通過(guò)Western blot技術(shù)檢測(cè)p53蛋白的表達(dá),通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)lncRNAp53urlnc的表達(dá)。構(gòu)建shlncRNAp53urlnc載體,包裝病毒,并轉(zhuǎn)染入SCC-3細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,采用MTT法、集落形成試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染shlncRNAp53urlnc后SCC-3細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況。結(jié)果 Doxycycline 處理 H1299p53teton 細(xì)胞后,p53 和 lncRNAp53urlnc 的表達(dá)均隨時(shí)間而增大;敲低SCC-3細(xì)胞中p53的表達(dá),...

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株與細(xì)菌
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑的配制和儲(chǔ)存方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 細(xì)胞傳代技術(shù)
            2.2.1.2 細(xì)胞凍存技術(shù)
            2.2.1.3 細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)
        2.2.2 藥物處理
        2.2.3 重組質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        2.2.4 慢病毒包裝和轉(zhuǎn)染
            2.2.4.1 慢病毒包裝
            2.2.4.2 慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 qRT PCR檢測(cè)
            2.2.5.1 細(xì)胞總RNA的抽提
            2.2.5.2 逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA
            2.2.5.3 PCR反應(yīng)
        2.2.6 Western blot檢測(cè)
        2.2.7 MTT法檢測(cè)
        2.2.8 集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 SCC-3細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 p53上調(diào)lncRNAp53urlnc表達(dá)
    3.3 敲低p53對(duì)SCC-3細(xì)胞中l(wèi)ncRNAp53urlnc表達(dá)的影響
    3.4 過(guò)表達(dá)p53對(duì)SCC-3細(xì)胞中l(wèi)ncRNAp53urlnc表達(dá)的影響
    3.5 shlncRNAp53urlnc干擾lncRNAp53urlnc的表達(dá)
    3.6 shlncRNAp53urlnc對(duì)SCC-3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3862335