目的通過重組質(zhì)粒載體,慢病毒包裝轉(zhuǎn)染技術(shù),體外研究長鏈非編碼RNA(lncRNA)與p53的表達之間關(guān)系,同時研究敲低lncRNAp53urlnc對舌鱗癌細胞(SCC-3)的影響,為將來舌鱗癌的治療提供新的思路。方法使用高通量測序技術(shù),對p53誘導上調(diào)系統(tǒng)的H1299細胞進行高通量測序技術(shù)分析,選取一條受p53誘導上調(diào)倍數(shù)明顯的lncRNA,即lncRNAp53urlnc為研究對象,構(gòu)建相應重組質(zhì)粒載體。培養(yǎng)SCC-3細胞,在SCC-3細胞中分別敲低和過表達p53后,提取各組RNA和蛋白,通過Western blot技術(shù)檢測p53蛋白的表達,通過實時定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測lncRNAp53urlnc的表達。構(gòu)建shlncRNAp53urlnc載體,包裝病毒,并轉(zhuǎn)染入SCC-3細胞,qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效率,采用MTT法、集落形成試驗來檢測轉(zhuǎn)染shlncRNAp53urlnc后SCC-3細胞生長增殖情況。結(jié)果 Doxycycline 處理 H1299p53teton 細胞后,p53 和 lncRNAp53urlnc 的表達均隨時間而增大;敲低SCC-3細胞中p53的表達,...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞株與細菌
        2.1.2 實驗主要試劑
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗所用主要試劑的配制和儲存方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.1.1 細胞傳代技術(shù)
            2.2.1.2 細胞凍存技術(shù)
            2.2.1.3 細胞復蘇技術(shù)
        2.2.2 藥物處理
        2.2.3 重組質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        2.2.4 慢病毒包裝和轉(zhuǎn)染
            2.2.4.1 慢病毒包裝
            2.2.4.2 慢病毒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 qRT PCR檢測
            2.2.5.1 細胞總RNA的抽提
            2.2.5.2 逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA
            2.2.5.3 PCR反應
        2.2.6 Western blot檢測
        2.2.7 MTT法檢測
        2.2.8 集落形成實驗檢測
    2.3 統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 SCC-3細胞的形態(tài)學觀察
    3.2 p53上調(diào)lncRNAp53urlnc表達
    3.3 敲低p53對SCC-3細胞中l(wèi)ncRNAp53urlnc表達的影響
    3.4 過表達p53對SCC-3細胞中l(wèi)ncRNAp53urlnc表達的影響
    3.5 shlncRNAp53urlnc干擾lncRNAp53urlnc的表達
    3.6 shlncRNAp53urlnc對SCC-3細胞生長的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3862335