目的探討舌鱗狀細(xì)胞癌(TSCC)患者唾液外泌體對(duì)TSCC細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)分子機(jī)制。方法采用差速超速離心法收集舌癌患者和健康對(duì)照者唾液外泌體。用透射電鏡和Western blot鑒定收集得到的沉淀。將唾液外泌體與TSCC細(xì)胞共培養(yǎng),檢測(cè)細(xì)胞增殖、GAS2和外泌體中微RNA-512-3p(miR-512-3p)的表達(dá)變化,并驗(yàn)證GAS2為miR-512-3p的靶基因。結(jié)果透射電鏡和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,提取的外泌體符合其結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)特征。噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)結(jié)果顯示,相比于對(duì)照組,TSCC組患者唾液外泌體明顯促進(jìn)TSCC細(xì)胞增殖(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,TSCC組患者唾液外泌體中cylinD1和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)水平明顯升高(P<0.05);qPCR結(jié)果顯示,TSCC患者唾液外泌體中miR-512-3p水平較健康對(duì)照者明顯升高(P <0.001),并且miR-512-3p過(guò)表達(dá)組的外泌體可明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖(P <0.05),其細(xì)胞p53表達(dá)水平降低(P<0.001)。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要儀器與試劑
        1.1.2 唾液采集
    1.2 方法
        1.2.1 外泌體提取和鑒定
        1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1.2.4 無(wú)外泌體培養(yǎng)基配制
        1.2.5 Western blot
        1.2.6 透射電鏡觀察外泌體形態(tài)
        1.2.7 外泌體miRNA提取及RT-qPCR
        1.2.8 噻唑藍(lán)（MTT）試驗(yàn)
        1.2.9 熒光素酶報(bào)告基因分析
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 外泌體鑒定
    2.2 TSCC患者唾液外泌體促進(jìn)CAL27細(xì)胞增殖
    2.3 TSCC患者唾液外泌體miR-512-3p高表達(dá)
    2.4 外泌體通過(guò)miR-512-3p促進(jìn)CAL27細(xì)胞增殖
    2.5 GAS2為miR-512-3p靶基因
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