目的:通過觀察Cal27細(xì)胞增殖活性、遷徙能力及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的變化,探討熱療對口腔鱗癌細(xì)胞Id-1表達(dá)水平的影響及機(jī)制。方法:1.Cal27細(xì)胞用含10%胎牛血清、1640培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用0.25%胰蛋白酶（含EDTA）消化收集Cal27細(xì)胞。用配置好的凍存液1ml將細(xì)胞凍存。采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)。2.采用CCK-8實(shí)驗(yàn)方法用450nm波長分別檢測43℃熱療1小時(shí)后0h、2h、4h、8h、12h各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞光密度值（OD）,標(biāo)記實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞的生長曲線,運(yùn)用t檢驗(yàn)計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對照組差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.采用劃痕實(shí)驗(yàn)分別于43℃熱療1小時(shí)后的0h、6h、12h、24h時(shí)間點(diǎn)觀察實(shí)驗(yàn)組與對照組細(xì)胞向中間遷徙情況,利用Image J軟件計(jì)算遷徙的面積并繪制折線圖,運(yùn)用t檢驗(yàn)計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對照組差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.將實(shí)驗(yàn)組對數(shù)期生長的細(xì)胞置于43℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1小時(shí)后繼續(xù)標(biāo)準(zhǔn)條件培養(yǎng)4小時(shí)后用于PCR實(shí)驗(yàn)。對照組不做任何處理。用Trizol裂解液提取總RNA,將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為c DNA,然后用Id-1和HSF... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2 CCK-8實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)用品
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2 細(xì)胞傳代
        3.3 細(xì)胞凍存
        3.4 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.5 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        3.6 CCK-8實(shí)驗(yàn)步驟
        3.7 劃痕實(shí)驗(yàn)步驟
        3.8 qRT-PCR
        3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    1 Cal27細(xì)胞系的形態(tài)觀察
    2 CCK-8檢測細(xì)胞增殖活性情況
    3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷徙能力
    4 熱療前后Cal27細(xì)胞中Id-1、HSF1的mRNA表達(dá)變化
        4.1 RNA濃度、純度測定
        4.2 qRT-PCR檢測Id-1、HSF1的mRNA表達(dá)水平
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
病例
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝



本文編號(hào)：3676851