目的:本實驗首先建立L6成肌細胞靜止期（G0期）模型,細胞在G0期仍可被激活并重新進入細胞循環(huán)周期,以確保后續(xù)實驗中細胞基本處于均衡一致狀態(tài),且活力尚可。在此基礎(chǔ),模擬成肌細胞應(yīng)力加載模型,在宏觀層面觀察應(yīng)力刺激成肌細胞體外生長時,細胞周期變化。從微觀層面探討絲裂原活化蛋白激酶（MAPK Mitogen--Activated Proton Kinase）信號通路中p38 MAPK與JNK如何交互作用調(diào)節(jié)下游相關(guān)蛋白最終參與到周期調(diào)節(jié)中,為闡明頜面部肌肉適應(yīng)性改建的機制提供依據(jù),為功能矯形治療提供理論支持。方法:實驗對象為大鼠成肌細胞L6,傳代培養(yǎng)后誘導(dǎo)細胞進入暫不分裂的休眠期,運用流式細胞術(shù)和蛋白免疫印跡法分別檢測細胞周期改變和Ki67表達變化,確認基本所有細胞進入G0期。使用含10%胎牛血清的促增殖培養(yǎng)液激活細胞,使重新進入G1期。分別于6 h、12 h、18 h、24 h觀察細胞數(shù)目及活力,提取樣本,檢測細胞周期的變化、增殖標志性蛋白Ki67及其他周期相關(guān)蛋白變化。將重新激活12 h的細胞分為對照組及加力組,加力組細胞施以周期性應(yīng)力,時間分別為1 h、3 h、6 h、12 h,加載... 

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一部分 成肌細胞體外培養(yǎng)-G0期模型的構(gòu)建
    材料與方法
        一、實驗材料
        二、實驗方法
    結(jié)果
        一、L6成肌細胞體外培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察
        二、G0期成肌細胞激活過程形態(tài)學(xué)觀察
        三、G0期及細胞激活過程中細胞周期變化
        四、G0期及細胞激活過程中相關(guān)蛋白表達變化
    討論
        一、L6成肌細胞體外培養(yǎng)最佳條件
        二、G0模型構(gòu)建意義
    結(jié)論
第二部分 應(yīng)力作用下p38與JNK交互對話影響L6成肌細胞周期
    材料與方法
        一、實驗材料
        二、實驗方法
    結(jié)果
        一、細胞形態(tài)及分布的觀察
        二、流式細胞周期變化及統(tǒng)計分析結(jié)果
        三、Western Blot相關(guān)蛋白表達
    討論
        應(yīng)力刺激激活細胞骨架相關(guān)蛋白
        絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）途徑
    結(jié)論
第三部分 p38特異性抑制劑對周期及蛋白表達的影響
    材料與方法
        一、實驗材料
        二、實驗方法
    結(jié)果
        一、SB203580可基本抑制p38通路活性
        二、抑制劑對細胞周期的影響
        三、特異性抑制劑對通路及相關(guān)蛋白的影響
    討論
    結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
臨床病例展示
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝



本文編號：3656589