本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)小鼠牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞向上皮樣細(xì)胞分化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：創(chuàng)面迅速再上皮化是減少瘢痕形成,提高大面積上皮缺損修復(fù)率的關(guān)鍵,研究發(fā)現(xiàn),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在一定條件誘導(dǎo)下可向上皮樣細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞等方向分化,但隨培養(yǎng)代數(shù)增加,BMSCs增殖速率減慢,細(xì)胞形態(tài)改變,分化能力下降,基因改變,限制了BMSCs的大規(guī)模應(yīng)用。近年學(xué)者從牙齦組織中分離培養(yǎng)出牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞(GMSCs),同BMSCs相比, GMSCs具有取材容易,增殖速率高,長期培養(yǎng)性能穩(wěn)定,不易衰老等特性。實(shí)驗(yàn)顯示,3D微球GMSCs注入小鼠靜脈后,可歸巢于病損區(qū)的上皮層和上皮下層,可能經(jīng)歷間充質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化(MET)分化為上皮樣細(xì)胞修復(fù)上皮損傷。目前,誘導(dǎo)GMSCs向上皮樣細(xì)胞分化及(MSCs的遷移機(jī)制尚無報(bào)道,本課題擬采用體外加入細(xì)胞因子的方法誘導(dǎo)小鼠GMSCs向上皮樣細(xì)胞分化,探討炎性因子IL-6、IL-10對小鼠GMSCs向上皮樣細(xì)胞分化的影響,并研究SDF-1能否誘導(dǎo)小鼠GMSCs遷移,為將GMSCs作為新的種子細(xì)胞治療上皮損傷提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：1.酶解法培養(yǎng)小鼠牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測表面標(biāo)記物CDllb、CD45、CD34、CD31、CD105、CD140、CD29、CD44、sca-1。2.誘導(dǎo)培養(yǎng)液(lOuM ATRA+20ng/ml EGF+5%FBS+DMEM培養(yǎng)基)培養(yǎng)牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞14天后,觀察細(xì)胞形態(tài),細(xì)胞免疫組織化學(xué)、免疫熒光檢測角蛋白18及波形蛋白表達(dá)情況。3.根據(jù)誘導(dǎo)條件的不同進(jìn)行分組,將普通培養(yǎng)液、誘導(dǎo)培養(yǎng)液、誘導(dǎo)培養(yǎng)液+IL-6、誘導(dǎo)培養(yǎng)液+IL-10分別設(shè)為對照組、誘導(dǎo)組、IL-6誘導(dǎo)組、IL-10誘導(dǎo)組,誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞14天后,免疫組化、免疫熒光檢測各組細(xì)胞角蛋白18及波形蛋白表達(dá)情況,并計(jì)數(shù)免疫熒光陽性細(xì)胞比例,比較各組間有無差別。MTT測定各組細(xì)胞11天內(nèi)的增殖曲線。4.使用transwell小室檢測SDF-1能否誘導(dǎo)小鼠GMSCs遷移。實(shí)驗(yàn)組：下室為100ng/ml SDF-la+2%FBS+DMEM培養(yǎng)基,上室為2%FBS+DMEM培養(yǎng)基。對照組：上下室均為2%FBS+DMEM培養(yǎng)基。上室接種細(xì)胞,22h后DAPI染色,計(jì)數(shù)遷移至膜下表面的細(xì)胞數(shù)。結(jié)果：1.培養(yǎng)出小鼠牙齦細(xì)胞,為典型成纖維細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測其間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物陽性,證實(shí)該細(xì)胞為牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞,符合進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)條件。2.誘導(dǎo)培養(yǎng)液培養(yǎng)后,牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)呈多角形、類鋪路石樣,免疫組化、免疫熒光示角蛋白18、波形蛋白陽性,而陰性對照組角蛋白18陰性,波形蛋白陽性。3.免疫組化、免疫熒光檢測誘導(dǎo)組、IL-6誘導(dǎo)組、IL-10誘導(dǎo)組角蛋白18、波形蛋白陽性,各組染色程度無明顯差異,陽性細(xì)胞比例無明顯差異(P0.05)。對照組角蛋白18陰性、波形蛋白陽性。各實(shí)驗(yàn)組同對照組相比,角蛋白18陽性細(xì)胞比例有明顯差異(P0.01),波形蛋白陽性細(xì)胞比較無明顯差別(P0.05)。細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示：第1、3、5、7、9天,各實(shí)驗(yàn)組A值均與對照組有明顯差別(P0.05),第3、5、7、9、11天時(shí),IL-6誘導(dǎo)組A值與誘導(dǎo)組有明顯差別(P0.05),只有第3天時(shí)IL-10誘導(dǎo)組A值與誘導(dǎo)組有明顯差別(P0.05),其余時(shí)間均無明顯差別(P0.05)。4.實(shí)驗(yàn)組同對照組相比,遷移至膜下表面的細(xì)胞數(shù)明顯增多(P0.01)。結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)中我們成功分離培養(yǎng)出小鼠GMSCs,發(fā)現(xiàn)小鼠GMSCs在一定濃度ATRA及EGF誘導(dǎo)下可表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)記物角蛋白18,提示其向上皮樣細(xì)胞分化,致炎因子IL-6、抑炎因子IL-10對此誘導(dǎo)條件下GMSCs表達(dá)角蛋白18無明顯促進(jìn)或抑制作用,為將GMSCs作為種子細(xì)胞修復(fù)上皮損傷提供了一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。研究GMSCs的遷移機(jī)制發(fā)現(xiàn),一定濃度的SDF-1可明顯誘導(dǎo)小鼠GMSCs遷移,GMSCs的遷移機(jī)制可用于促進(jìn)GMSCs歸巢至損傷部位,增強(qiáng)其修復(fù)損傷能力。
【關(guān)鍵詞】：間質(zhì)干細(xì)胞 上皮樣細(xì)胞 細(xì)胞分化 細(xì)胞遷移 趨化因子CXCL12
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R78
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 主要符號及縮略詞12-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-28
• 結(jié)論28-29
• 綜述29-36
• 附圖36-42
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 致謝49-50
• 附件50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 朱紅燕;張宏;傅晉翔;張學(xué)光;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與急性皮膚放射損傷的修復(fù)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2009年32期

2 方利君,付小兵,孫同柱,李建福,程飚,楊銀輝,王玉新,王通;在體誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為表皮細(xì)胞的初步觀察[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年04期

  本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)小鼠牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞向上皮樣細(xì)胞分化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：365008