發(fā)布時(shí)間：2022-01-06 10:49

　　目的：構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-N1/Igf1，Igf1與EGFP融合表達(dá)。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)pEGFP-N1/Igf1轉(zhuǎn)染SD大鼠牙囊細(xì)胞，分析其對細(xì)胞增殖及分化效應(yīng)的早期影響，為Igf1基因在牙周組織工程修復(fù)與再生中的應(yīng)用提供參考。方法：1.根據(jù)SD大鼠Igf1基因在GeneBank中的序列設(shè)計(jì)引物。巢氏PCR擴(kuò)增出目的基因，與pMD-19T載體連接構(gòu)建pMD-19T/Igf1克隆載體。2.應(yīng)用限制性內(nèi)切酶EcoR I及Xho I對pMD-19T/Igf1與pEGFP-N1質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切。使用連接酶Solution I連接酶切后的Igf1片段及pEGFP-N1片段。轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α后進(jìn)行PCR、酶切、測序等鑒定。3.原代培養(yǎng)SD大鼠牙囊細(xì)胞，細(xì)胞傳至第四代時(shí)進(jìn)行來源鑒定。實(shí)驗(yàn)分組：①空白組、②pEGFP-N1/Igf1組、③pEGFP-N1+脂質(zhì)體組、④pEGFP-N1/Igf1+脂質(zhì)體組。4.熒光觀察：轉(zhuǎn)染后每隔24h在倒置熒光顯微鏡下觀察綠色熒光的表達(dá)情況，連續(xù)觀察96h。5.細(xì)胞活力檢測（MTT法）：96孔板接種細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后每隔24h檢測各組細(xì)胞活力，連續(xù)檢測8d。6. A... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

第四代牙囊細(xì)胞生長曲線

第十代牙囊細(xì)胞生長曲線

巢式PCR終產(chǎn)物電泳鑒定圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基因治療中非病毒轉(zhuǎn)移技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 劉婧,錢林學(xué),胡向東.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2012(19)
[2]緩控釋微丸制劑的研究進(jìn)展[J]. 原麗慧,卞俊.  海軍醫(yī)學(xué)雜志. 2012(02)
[3]生長因子在牙周組織再生中的有效釋放方式[J]. 王姹,徐燕.  國際口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2012(02)
[4]增強(qiáng)型綠色熒光蛋白慢病毒載體標(biāo)記人牙周膜干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 姜寶岐,文勇,黃海云,崔軍,梁晉,馬曉妮,蘭晶,徐欣.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2012(01)
[5]胰島素樣生長因子-1對成纖維細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響[J]. 孫海鈺,張彬,管濤,劉亮,李玉波,王東.  中華創(chuàng)傷骨科雜志. 2012 (01)
[6]增強(qiáng)型綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)染對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的影響[J]. 李亞偉,王冰,呂國華,劉偉東,李磊.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2011(12)
[7]胰島素樣生長因子-1與骨重建[J]. 王石,鄭巍.  武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2011(11)
[8]胰島素樣生長因子IGF-1的研究進(jìn)展[J]. 邢海權(quán),閆夢菲.  畜禽業(yè). 2011(08)
[9]藥物控釋制劑載體的研究進(jìn)展[J]. 李樂道.  西北藥學(xué)雜志. 2011(03)
[10]陽離子脂質(zhì)體運(yùn)載基因的跨膜機(jī)制[J]. 丁會(huì)芹,崔韶輝,王冰,洪洋,張樹彪.  生命科學(xué). 2011(05)

博士論文
[1]rhBMP-2促進(jìn)兔脛骨延長區(qū)骨愈合及骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 徐鵬.吉林大學(xué) 2004



本文編號：3572313