本文關(guān)鍵詞：脫落乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體用于牙髓再生的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牙髓再生是現(xiàn)今研究的熱點,最主要的研究方法是基于組織工程原理,利用間充質(zhì)干細(xì)胞結(jié)合生物支架材料進行異位和原位的組織重建。目前實驗研究多數(shù)為前瞻性的組織學(xué)和動物模型探索,但至今尚未實現(xiàn)具有完整組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和良好生理功能的牙髓再生。此外由于間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用方式和生物支架的材料性能存在倫理學(xué)限制和生物安全性驗證,要進行臨床試驗應(yīng)用仍需進一步深入研究。要真正實現(xiàn)具有生理功能性牙髓再生的臨床應(yīng)用,種子細(xì)胞的來源、支架材料的選擇以及有效的誘導(dǎo)微環(huán)境是亟待解決的關(guān)鍵問題。脫落乳牙牙髓干細(xì)胞(SHED)是源于脫落器官的一類處于發(fā)育早期的牙源性干細(xì)胞,具有良好的生物學(xué)性能,包括較高的增殖能力、更為廣泛的多向分化能力、以及良好的免疫調(diào)控能力;并且其臨床來源也更為廣泛,便于自體的組織再生應(yīng)用。此外近年來出現(xiàn)的細(xì)胞聚合體(aggregate)是一種先進的組織工程學(xué)技術(shù),其不但可以保持干細(xì)胞活性,擁有良好性能的生物支架-自分泌的細(xì)胞間基質(zhì),而且富含細(xì)胞生長和分化所需的誘導(dǎo)因子。本研究擬通過乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體的生物學(xué)性能檢測、牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體組織再生實驗,明確其用于全牙根牙髓再生的可行性,進而利用動物模型的治療實驗,探討乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體治療年輕恒牙牙髓壞死的效果,以期為兒童牙體牙髓疾病治療提供新的治療理念和策略,并為臨床試驗應(yīng)用提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。第一部分脫落乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體生物學(xué)性能的實驗研究目的:明確脫落乳牙牙髓干細(xì)胞及其聚合體的生物學(xué)性能。方法:分離和培養(yǎng)人類脫落乳牙的牙髓干細(xì)胞與恒牙牙髓干細(xì)胞(dpsc),檢測并比較兩者分子表面標(biāo)記、克隆形成能力、增殖水平以及多向分化能力;進而誘導(dǎo)制備shed細(xì)胞聚合體,通過組織學(xué)、免疫組織化學(xué)方法檢測其生物學(xué)性能。結(jié)果:脫落乳牙牙髓干細(xì)胞與牙髓干細(xì)胞均能夠陽性表達間充質(zhì)來源的表面標(biāo)志stro-1,cd90和cd146,而造血系來源標(biāo)志物cd34為陰性。shed細(xì)胞在克隆形成能力、增殖水平、成骨成脂分化能力方面均高于dpsc。制備的shed細(xì)胞聚合體厚度適中、質(zhì)地堅韌;he染色觀察shed細(xì)胞聚合體含有較多的未分化細(xì)胞以及豐富的細(xì)胞外基質(zhì);masson染色可見交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的膠原纖維。結(jié)論:乳牙牙髓干細(xì)胞及其聚合體具有良好的生物學(xué)性能,是一類理想的種子細(xì)胞和適宜的牙髓再生應(yīng)用方式。第二部分乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體構(gòu)建牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體的實驗研究目的:探索shed細(xì)胞聚合體用于組織工程構(gòu)建牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體的實驗方法。方法:收集正畸拔除牙齒,根管清理并制備全長牙根組織支架;實驗組根管內(nèi)植入shed細(xì)胞聚合體,對照組根管內(nèi)充填氫氧化鈣糊劑,而后移植裸鼠皮下孵育,術(shù)后3月組織學(xué)取材;獲取根管內(nèi)的再生組織,細(xì)胞分離并培養(yǎng),對其表面分子標(biāo)記、克隆形成能力、增殖水平以及成骨成脂分化能力檢測并與shed細(xì)胞進行對比;同時取材組織脫礦后利用he、免疫組化染色等方法評估異位再生情況。結(jié)果:組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)實驗組的再生組織幾乎充盈整個根管,類似正常牙髓組織,免疫組化染色可見組織中dspp、cd31、nestin均為陽性表達,也證明其具有繼發(fā)性牙本質(zhì)、成牙本質(zhì)細(xì)胞層、血管及神經(jīng)組織結(jié)構(gòu);再生組織細(xì)胞具有與shed細(xì)胞相同的表面分子標(biāo)記,同時其克隆形成能力、增殖水平以及多向分化能力均與shed細(xì)胞相似;免疫熒光染色顯示再生組織的大部分血管及神經(jīng)源于shed細(xì)胞分化而來;而對照組根管內(nèi)可見鈣化團塊及肉芽結(jié)締組織的混雜結(jié)構(gòu)。結(jié)論:shed細(xì)胞聚合體在牙根管內(nèi)微環(huán)境中可以異位再生形成正常形態(tài)的牙髓-牙本質(zhì)復(fù)合體結(jié)構(gòu)。第三部分乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體用于牙髓再生的動物學(xué)實驗?zāi)康?利用動物實驗?zāi)Ｐ蜋z測小型豬(mini-pig)乳牙牙髓干細(xì)胞(SPED)細(xì)胞聚合體進行原位牙髓再生的應(yīng)用效果。方法:分離和培養(yǎng)Mini-Pig的乳牙牙髓干細(xì)胞,檢測和分析其細(xì)胞生物學(xué)行為,進而誘導(dǎo)制備SPED細(xì)胞聚合體;建立年輕恒牙牙髓壞死的實驗動物模型,設(shè)置SPED聚合體再生組、傳統(tǒng)根尖誘導(dǎo)成形治療組和正常牙髓對照組;術(shù)后4月進行受試牙齒牙髓活力反應(yīng)測試,而后常規(guī)組織學(xué)取材,利用HE、免疫組化、免疫熒光染色等方法觀察牙髓再生和牙根尖形成情況。結(jié)果:放射學(xué)檢查顯示SPED聚合體再生組牙根繼續(xù)發(fā)育,并且對機械刺激出現(xiàn)牙髓疼痛反應(yīng);組織學(xué)HE染色檢測發(fā)現(xiàn)再生組受試牙齒牙根繼續(xù)發(fā)育并形成正常的根尖形態(tài),此外全長根管內(nèi)可見類牙髓結(jié)構(gòu)的再生組織;免疫組化和熒光染色可見組織中CD31、Nestin、CGRP、TRPV1、TRPM8表達陽性細(xì)胞的規(guī)則分布,與正常牙髓對照組類似;而傳統(tǒng)根尖誘導(dǎo)成形治療組僅在根端形成不規(guī)則圓鈍的根尖結(jié)構(gòu),根管內(nèi)未見牙髓組織形成。結(jié)論:SPED聚合體可以實現(xiàn)全長牙根的原位牙髓再生,再生組織不僅具有正常形態(tài)結(jié)構(gòu),而且具有牙本質(zhì)形成、牙髓感覺、誘導(dǎo)牙根尖成形的生理功能。
【關(guān)鍵詞】：乳牙牙髓干細(xì)胞 細(xì)胞聚合體 牙本質(zhì)牙髓復(fù)合體 牙髓再生
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R788
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-13
• 前言13-15
• 文獻回顧15-26
• 第一部分 脫落乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體生物學(xué)性能的實驗研究26-36
• 1 實驗材料27
• 2 實驗方法27-33
• 3 實驗結(jié)果33-34
• 4 討論34-36
• 第二部分 乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體構(gòu)建牙本質(zhì)牙髓復(fù)合體的實驗研究36-45
• 1 實驗材料36-37
• 2 實驗方法37-41
• 3 實驗結(jié)果41-42
• 4 討論42-45
• 第三部分 乳牙牙髓干細(xì)胞聚合體用于牙髓再生的動物學(xué)實驗45-54
• 1 實驗材料46
• 2 實驗方法46-49
• 3 實驗結(jié)果49-51
• 4 討論51-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻55-65
• 附錄65-71
• 個人簡歷和研究成果71-72
• 致謝72

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本文編號：356233