本文關鍵詞：趨化因子受體CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鱗癌細胞株的表達及其配體MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡及侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是一種常見的頭頸部惡性腫瘤,其中舌鱗狀細胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)發(fā)病率最高(約占OSCC的25%-40%),具有高侵襲性的生長方式和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特征。盡管癌癥的治療已經(jīng)取得了重大進展,但從20世紀60年代至今,OSCC的死亡率基本保持不變,5年生存率徘徊在50%左右,復發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是影響預后的重要因素。然而腫瘤的復發(fā)和轉(zhuǎn)移是個復雜的過程,這不僅依賴于腫瘤細胞內(nèi)在的特征,還依賴于腫瘤所處微環(huán)境的一些因素。 早在1979年,Lord就提出了腫瘤微環(huán)境的概念,即指腫瘤在其發(fā)生過程中的內(nèi)環(huán)境,由腫瘤細胞本身、間質(zhì)細胞、微血管、組織液及少量浸潤細胞共同組成的一個復雜的集合系統(tǒng)。間質(zhì)細胞和癌細胞之間可以相互誘導、相互作用,以利于腫瘤的增殖和侵襲。 然而,在腫瘤微環(huán)境中常常存在著慢性炎癥,這種炎癥多數(shù)是由感染、低氧、低PH、高壓等特性引起。存在大量的生長因子、細胞趨化因子和多種蛋白水解酶,所產(chǎn)生的免疫炎性反應有利于腫瘤的增殖、侵襲、粘附、血管生成以及對放、化療的抵抗,促使惡性腫瘤產(chǎn)生和發(fā)展。 不難發(fā)現(xiàn),在對腫瘤微環(huán)境研究的很多方面都滲透著腫瘤與炎癥的聯(lián)系,腫瘤與炎癥的關系已經(jīng)成為腫瘤研究的新方向,腫瘤炎癥微環(huán)境的研究已經(jīng)成為當今腫瘤研究的熱點。我們在前期實驗中利用高通量、精確的蛋白質(zhì)芯片技術(抗炎癥因子芯片)對3種不同侵襲能力的人舌鱗癌細胞(UM-1、CAL-27、 Tca-8113)和人正�？谇火つど掀ぜ毎囵B(yǎng)上清中的炎癥因子進行了初步篩選后發(fā)現(xiàn),與侵襲性相對較低腫瘤細胞(Tca-8113)和正�？谇火つぜ毎啾�,巨噬細胞炎癥蛋白-1β(MIP-1β)、巨噬細胞炎癥蛋白-3α (MIP-3α)、干擾素誘導蛋白-10(IP-10)在侵襲性相對較高的腫瘤細胞株(UM-1、CAL-27)中高表達。然而,在人舌鱗癌腫瘤細胞中MIP-1β、MIP-3α、IP-10相關受體CCR5、 CCR6、CXCR3的表達國內(nèi)外尚未見文獻報道,MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、 IP-10/CXCR3軸在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的具體機制還不清楚。 MIP-1β、MIP-3α、IP-10都是趨化因子超家族成員,能夠趨化細胞的定向運動。現(xiàn)在越來越多的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細胞可以自分泌某些趨化因子,通過促進腫瘤細胞增殖,瘤內(nèi)新生血管的生成,細胞外基質(zhì)蛋白酶的分泌,或者抑制機體的抗腫瘤免疫,促進腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。趨化因子和其相應的受體相互作用,在抗腫瘤的免疫、腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著廣泛的生理和病理作用。而在舌鱗癌中關于MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、IP-10/CXCR3的相關研究較少,其各自在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的具體機制還不清楚。本實驗通過Western Blot和免疫熒光染色技術檢測CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的表達情況；通過CCK-8法分別檢測MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖的影響；通過Annexin V/PI雙染流式細胞儀分別檢測其對CAL-27細胞凋亡的影響；通過Transwell侵襲實驗及明膠酶譜實驗檢測其對CAL-27細胞侵襲性的影響,初步探討MIP-1β、MIP-3α、IP-10在舌鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。 研究內(nèi)容共分三章：第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的表達；第二章MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究；第三章MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27侵襲性影響的研究。 第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的表達 1.目的： 檢測在3種人舌鱗癌細胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、 CXCR3蛋白的表達及定位。為體外探討MIP-1β、MIP-3α、IP-10對腫瘤細胞生物學行為的研究奠定基礎。 2.方法： 取對數(shù)期生長良好的細胞用于實驗,分別采用Western blot和免疫熒光染色對3種人舌鱗癌細胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、CXCR3的表達進行檢測。 3.結(jié)果： Western blot結(jié)果顯示CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株均有表達,分別在40.524k D、42.494k D、40.660k D處均可見蛋白表達條帶。免疫熒光染色結(jié)果顯示CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的細胞膜及胞質(zhì)內(nèi)均有表達。 第二章：MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究 1.目的： 觀察MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡的影響。 2.方法： 1.取對數(shù)期生長良好的細胞,經(jīng)無血清培養(yǎng)同步化處理24h后用于實驗。根據(jù)MIP-1β(MIP-3α、IP-10)刺激濃度的不同,實驗分別分為四組：對照組(0ng/mL組)、10ng/mL組、20ng/mL組、40ng/mL組。用CCK-8法分別檢測各實驗組和對照組在12h、24h、48h時,對CAL-27細胞增殖的影響。 2.實驗分組同前,根據(jù)實驗分組分別加入0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mLMIP-1β(MIP-3α、IP-10)處理24h, Annexin V/PI雙染流式細胞儀檢測CAL-27細胞的凋亡情況。 3.結(jié)果： (1)和對照組相比,12h、24h時,10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的MIP-1β對CAL-27細胞均有促進增殖的作用(P值均小于0.05)；48h時,10ng/mL、20ng/mL的MIP-1β對CAL-27細胞有促進增殖的作用(P值均小于0.05),但40ng/mLMIP-1β對CAL-27細胞的增殖無影響(P0.05)；24h時,40ng/mL MIP-1β組細胞凋亡率顯著高于對照組(P0.05)；而10ng/mL、20ng/mL MIP-1β組細胞凋亡率和對照組之間無顯著性差異(P值均大于0.05)。 (2)和對照組相比,12h、24h、48h時,10ng/mL、20ng/ML、40ng/mL的MIP-3α對CAL-27細胞均有促進增殖的作用(P值均小于0.05),但各濃度之間沒有顯著性差異(P值均大于0.05)；24h時,各實驗組CAL-27細胞凋亡率和對照組之間均無顯著性差異(P值均大于0.05)。 (3)和對照組相比,12h時,10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的IP-10均能夠促進CAL-27細胞增殖(P0.05),并且存在濃度依賴性；24h時,不同濃度的IP-10亦能夠促進CAL-27增殖(P0.05),但濃度依賴性消失；在48h時,只有40ng/mL的IP-10能夠促進CAL-27增殖(P0.05),10ng/mL、20ng/mL的IP-10對CAL-27細胞的增殖無促進作用(P0.05)；當IP-10的刺激濃度為10ng/mL和20ng/mL時,隨著作用時間的延長,其增殖率下降,在48h時對細胞增殖已無促進作用。24h時,各實驗組CAL-27細胞的凋亡率均明顯高于對照組(P值均小于0.05),但各濃度之間未見顯著差異(P值均大于0.05)。 第三章：MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27侵襲性影響的研究 1.目的： 觀察MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27侵襲性的影響。 2.方法： 1.本實驗采用Transwell侵襲實驗分別觀察對照組Ong/mL PBS和實驗組80ng/mLMIP-1β (MIP-3α、IP-10)對人舌鱗癌細胞CAL-27侵襲性的影響； 2.采用明膠酶譜實驗分別驗證實驗組80ng/mL MIP-3α、IP-10對CAL-27細胞的促侵襲效應,并檢測處理24h后各組細胞培養(yǎng)上清中MMP-2、MMP-9的酶活性情況。以相同體積的PBS溶液設為陰性對照。 3.結(jié)果： Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示：80ng/mL MIP-3a、IP-10組CAL-27細胞的侵襲率顯著高于對照組(P均小于0.05),而80ng/mL MIP-1β組CAL-27細胞的侵襲率和對照組無顯著性差異(P0.05)；明膠酶譜實驗結(jié)果顯示：80ng/mL MIP-3α、IP-10組細胞培養(yǎng)上清中MMP-2、MMP-9的活性均顯著高于對照組(P均小于0.05)。 全文結(jié)論： 1. CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的細胞膜及胞質(zhì)中均有表達； 2. MIP-1β對人舌鱗癌細胞CAL-27有促進增殖的作用,但相對較高濃度的MIP-1β對CAL-27的凋亡也有促進作用。隨著較高濃度MIP-1β作用時間的延長,促增殖作用在減弱,而這種減弱可能是由較高濃度MIP-1β促凋亡作用的逐步發(fā)揮所引起的； 3. MIP-3α對人舌鱗癌細胞CAL-27有促進增殖的作用,而對其凋亡無顯著影響； 4.IP-10既能促進CAL-27細胞的增殖又能促進其凋亡。隨著作用時間的延長,[P-10的促增殖作用在減弱,而這種作用的減弱可能是由IP-10促凋亡作用的逐步發(fā)揮所引起的； 5. MIP-3α、IP-10能夠顯著提高人舌鱗癌細胞CAL-27的侵襲性。
【關鍵詞】：舌癌 趨化因子 增殖 凋亡 侵襲 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.86
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-22
• 第一章 CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細胞株的表達22-35
• 1. 材料與方法22-28
• 2. 結(jié)果28-32
• 3. 討論32-34
• 4. 結(jié)論34-35
• 第二章 MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究35-56
• 1. 材料與方法35-37
• 2. 統(tǒng)計方法37
• 3. 結(jié)果37-48
• 4. 討論48-54
• 5. 結(jié)論54-56
• 第三章 MIP-1β、MP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27侵襲性的影響56-69
• 1 材料與方法56-60
• 2. 統(tǒng)計方法60
• 3. 結(jié)果60-64
• 4. 討論64-68
• 5. 結(jié)論68-69
• 參考文獻69-76
• 縮略語表76-78
• 成果78-79
• 致謝79-80

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  本文關鍵詞：趨化因子受體CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鱗癌細胞株的表達及其配體MIP-1β、MIP-3α、IP-10對人舌鱗癌細胞CAL-27增殖、凋亡及侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：355629