本文關(guān)鍵詞：趨化因子受體CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)及其配體MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡及侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)是一種常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤,其中舌鱗狀細(xì)胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)發(fā)病率最高(約占OSCC的25%-40%),具有高侵襲性的生長(zhǎng)方式和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特征。盡管癌癥的治療已經(jīng)取得了重大進(jìn)展,但從20世紀(jì)60年代至今,OSCC的死亡率基本保持不變,5年生存率徘徊在50%左右,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是影響預(yù)后的重要因素。然而腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,這不僅依賴(lài)于腫瘤細(xì)胞內(nèi)在的特征,還依賴(lài)于腫瘤所處微環(huán)境的一些因素。 早在1979年,Lord就提出了腫瘤微環(huán)境的概念,即指腫瘤在其發(fā)生過(guò)程中的內(nèi)環(huán)境,由腫瘤細(xì)胞本身、間質(zhì)細(xì)胞、微血管、組織液及少量浸潤(rùn)細(xì)胞共同組成的一個(gè)復(fù)雜的集合系統(tǒng)。間質(zhì)細(xì)胞和癌細(xì)胞之間可以相互誘導(dǎo)、相互作用,以利于腫瘤的增殖和侵襲。 然而,在腫瘤微環(huán)境中常常存在著慢性炎癥,這種炎癥多數(shù)是由感染、低氧、低PH、高壓等特性引起。存在大量的生長(zhǎng)因子、細(xì)胞趨化因子和多種蛋白水解酶,所產(chǎn)生的免疫炎性反應(yīng)有利于腫瘤的增殖、侵襲、粘附、血管生成以及對(duì)放、化療的抵抗,促使惡性腫瘤產(chǎn)生和發(fā)展。 不難發(fā)現(xiàn),在對(duì)腫瘤微環(huán)境研究的很多方面都滲透著腫瘤與炎癥的聯(lián)系,腫瘤與炎癥的關(guān)系已經(jīng)成為腫瘤研究的新方向,腫瘤炎癥微環(huán)境的研究已經(jīng)成為當(dāng)今腫瘤研究的熱點(diǎn)。我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中利用高通量、精確的蛋白質(zhì)芯片技術(shù)(抗炎癥因子芯片)對(duì)3種不同侵襲能力的人舌鱗癌細(xì)胞(UM-1、CAL-27、 Tca-8113)和人正常口腔黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)上清中的炎癥因子進(jìn)行了初步篩選后發(fā)現(xiàn),與侵襲性相對(duì)較低腫瘤細(xì)胞(Tca-8113)和正�？谇火つぜ�(xì)胞相比,巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1β(MIP-1β)、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-3α (MIP-3α)、干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)在侵襲性相對(duì)較高的腫瘤細(xì)胞株(UM-1、CAL-27)中高表達(dá)。然而,在人舌鱗癌腫瘤細(xì)胞中MIP-1β、MIP-3α、IP-10相關(guān)受體CCR5、 CCR6、CXCR3的表達(dá)國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、 IP-10/CXCR3軸在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的具體機(jī)制還不清楚。 MIP-1β、MIP-3α、IP-10都是趨化因子超家族成員,能夠趨化細(xì)胞的定向運(yùn)動(dòng)。現(xiàn)在越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞可以自分泌某些趨化因子,通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,瘤內(nèi)新生血管的生成,細(xì)胞外基質(zhì)蛋白酶的分泌,或者抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。趨化因子和其相應(yīng)的受體相互作用,在抗腫瘤的免疫、腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮著廣泛的生理和病理作用。而在舌鱗癌中關(guān)于MIP-1β/CCR5、MIP-3α/CCR6、IP-10/CXCR3的相關(guān)研究較少,其各自在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的具體機(jī)制還不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Western Blot和免疫熒光染色技術(shù)檢測(cè)CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)情況；通過(guò)CCK-8法分別檢測(cè)MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖的影響；通過(guò)Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)其對(duì)CAL-27細(xì)胞凋亡的影響；通過(guò)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)及明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)CAL-27細(xì)胞侵襲性的影響,初步探討MIP-1β、MIP-3α、IP-10在舌鱗癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。 研究?jī)?nèi)容共分三章：第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)；第二章MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究；第三章MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27侵襲性影響的研究。 第一章CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá) 1.目的： 檢測(cè)在3種人舌鱗癌細(xì)胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、 CXCR3蛋白的表達(dá)及定位。為體外探討MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的研究奠定基礎(chǔ)。 2.方法： 取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),分別采用Western blot和免疫熒光染色對(duì)3種人舌鱗癌細(xì)胞株UM-1、CAL-27、Tca-8113中CCR5、CCR6、CXCR3的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。 3.結(jié)果： Western blot結(jié)果顯示CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株均有表達(dá),分別在40.524k D、42.494k D、40.660k D處均可見(jiàn)蛋白表達(dá)條帶。免疫熒光染色結(jié)果顯示CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞膜及胞質(zhì)內(nèi)均有表達(dá)。 第二章：MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究 1.目的： 觀(guān)察MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡的影響。 2.方法： 1.取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)良好的細(xì)胞,經(jīng)無(wú)血清培養(yǎng)同步化處理24h后用于實(shí)驗(yàn)。根據(jù)MIP-1β(MIP-3α、IP-10)刺激濃度的不同,實(shí)驗(yàn)分別分為四組：對(duì)照組(0ng/mL組)、10ng/mL組、20ng/mL組、40ng/mL組。用CCK-8法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在12h、24h、48h時(shí),對(duì)CAL-27細(xì)胞增殖的影響。 2.實(shí)驗(yàn)分組同前,根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組分別加入0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mLMIP-1β(MIP-3α、IP-10)處理24h, Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)CAL-27細(xì)胞的凋亡情況。 3.結(jié)果： (1)和對(duì)照組相比,12h、24h時(shí),10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的MIP-1β對(duì)CAL-27細(xì)胞均有促進(jìn)增殖的作用(P值均小于0.05)；48h時(shí),10ng/mL、20ng/mL的MIP-1β對(duì)CAL-27細(xì)胞有促進(jìn)增殖的作用(P值均小于0.05),但40ng/mLMIP-1β對(duì)CAL-27細(xì)胞的增殖無(wú)影響(P0.05)；24h時(shí),40ng/mL MIP-1β組細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組(P0.05)；而10ng/mL、20ng/mL MIP-1β組細(xì)胞凋亡率和對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異(P值均大于0.05)。 (2)和對(duì)照組相比,12h、24h、48h時(shí),10ng/mL、20ng/ML、40ng/mL的MIP-3α對(duì)CAL-27細(xì)胞均有促進(jìn)增殖的作用(P值均小于0.05),但各濃度之間沒(méi)有顯著性差異(P值均大于0.05)；24h時(shí),各實(shí)驗(yàn)組CAL-27細(xì)胞凋亡率和對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異(P值均大于0.05)。 (3)和對(duì)照組相比,12h時(shí),10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的IP-10均能夠促進(jìn)CAL-27細(xì)胞增殖(P0.05),并且存在濃度依賴(lài)性；24h時(shí),不同濃度的IP-10亦能夠促進(jìn)CAL-27增殖(P0.05),但濃度依賴(lài)性消失；在48h時(shí),只有40ng/mL的IP-10能夠促進(jìn)CAL-27增殖(P0.05),10ng/mL、20ng/mL的IP-10對(duì)CAL-27細(xì)胞的增殖無(wú)促進(jìn)作用(P0.05)；當(dāng)IP-10的刺激濃度為10ng/mL和20ng/mL時(shí),隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),其增殖率下降,在48h時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖已無(wú)促進(jìn)作用。24h時(shí),各實(shí)驗(yàn)組CAL-27細(xì)胞的凋亡率均明顯高于對(duì)照組(P值均小于0.05),但各濃度之間未見(jiàn)顯著差異(P值均大于0.05)。 第三章：MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27侵襲性影響的研究 1.目的： 觀(guān)察MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27侵襲性的影響。 2.方法： 1.本實(shí)驗(yàn)采用Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)分別觀(guān)察對(duì)照組Ong/mL PBS和實(shí)驗(yàn)組80ng/mLMIP-1β (MIP-3α、IP-10)對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27侵襲性的影響； 2.采用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)分別驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組80ng/mL MIP-3α、IP-10對(duì)CAL-27細(xì)胞的促侵襲效應(yīng),并檢測(cè)處理24h后各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-2、MMP-9的酶活性情況。以相同體積的PBS溶液設(shè)為陰性對(duì)照。 3.結(jié)果： Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：80ng/mL MIP-3a、IP-10組CAL-27細(xì)胞的侵襲率顯著高于對(duì)照組(P均小于0.05),而80ng/mL MIP-1β組CAL-27細(xì)胞的侵襲率和對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P0.05)；明膠酶譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：80ng/mL MIP-3α、IP-10組細(xì)胞培養(yǎng)上清中MMP-2、MMP-9的活性均顯著高于對(duì)照組(P均小于0.05)。 全文結(jié)論： 1. CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的細(xì)胞膜及胞質(zhì)中均有表達(dá)； 2. MIP-1β對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27有促進(jìn)增殖的作用,但相對(duì)較高濃度的MIP-1β對(duì)CAL-27的凋亡也有促進(jìn)作用。隨著較高濃度MIP-1β作用時(shí)間的延長(zhǎng),促增殖作用在減弱,而這種減弱可能是由較高濃度MIP-1β促凋亡作用的逐步發(fā)揮所引起的； 3. MIP-3α對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27有促進(jìn)增殖的作用,而對(duì)其凋亡無(wú)顯著影響； 4.IP-10既能促進(jìn)CAL-27細(xì)胞的增殖又能促進(jìn)其凋亡。隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),[P-10的促增殖作用在減弱,而這種作用的減弱可能是由IP-10促凋亡作用的逐步發(fā)揮所引起的； 5. MIP-3α、IP-10能夠顯著提高人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27的侵襲性。
【關(guān)鍵詞】：舌癌 趨化因子 增殖 凋亡 侵襲 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-22
• 第一章 CCR5、CCR6、CXCR3在3種人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)22-35
• 1. 材料與方法22-28
• 2. 結(jié)果28-32
• 3. 討論32-34
• 4. 結(jié)論34-35
• 第二章 MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡影響的研究35-56
• 1. 材料與方法35-37
• 2. 統(tǒng)計(jì)方法37
• 3. 結(jié)果37-48
• 4. 討論48-54
• 5. 結(jié)論54-56
• 第三章 MIP-1β、MP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27侵襲性的影響56-69
• 1 材料與方法56-60
• 2. 統(tǒng)計(jì)方法60
• 3. 結(jié)果60-64
• 4. 討論64-68
• 5. 結(jié)論68-69
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 縮略語(yǔ)表76-78
• 成果78-79
• 致謝79-80

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7 劉祥德;大鼠肝移植術(shù)后肝內(nèi)趨化因子/受體的表達(dá)及意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 呂梅勵(lì);mMIP-1α-DT390重組免疫毒素治療小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的研究[D];四川大學(xué);2006年

9 劉煜;1型糖尿病早期診斷和早期防治研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

10 劉玲;Toll樣受體9在小鼠皮膚天然免疫中作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 褚洪星;趨化因子受體CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)及其配體MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡及侵襲作用的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 國(guó)晉菘;納秒脈沖電場(chǎng)聯(lián)合吉西他濱對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞株Cal-27細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲能力的影響[D];蘭州大學(xué);2012年

3 王興兵;趨化因子受體反義肽核酸抑制小鼠皮膚移植排斥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2002年

4 俞小玲;異硫氰酸芐基酯對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[D];浙江大學(xué);2011年

5 周淑芬;趨化因子受體CXCR3，CCR5，，CCR3在免疫性血小板減少癥患者脾臟中的表達(dá)[D];山東大學(xué);2013年

6 張秀靜;植物乳酸桿菌的代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)人舌鱗癌CAL-27細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];佳木斯大學(xué);2013年

7 史戰(zhàn)國(guó);CCR5（及其配體）、CXCR3在RA患者外周血、滑液Th1和MPS細(xì)胞中表達(dá)及其意義的研究[D];中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 何海蕾;1400W對(duì)缺氧培養(yǎng)的人舌鱗狀細(xì)胞癌CAL-27細(xì)胞株iNOS和MMP-9表達(dá)及意義[D];南昌大學(xué);2010年

9 李書(shū)光;慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰中CCR6的測(cè)定及意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2010年

10 曾曉珊;趨化因子受體CCR5在胃癌中的表達(dá)及其意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：趨化因子受體CCR5、CCR6、CXCR3在不同人舌鱗癌細(xì)胞株的表達(dá)及其配體MIP-1β、MIP-3α、IP-10對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞CAL-27增殖、凋亡及侵襲作用的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：355629