目的:針對(duì)不同胚源的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）表現(xiàn)出的衰老差異,探討組蛋白去甲基化酶Jmjd3對(duì)衰老的調(diào)控作用。方法:1.體外提取大鼠下頜骨（mandibular,M）和脛骨（tibia,T）的BMSCs,全骨髓貼壁培養(yǎng)并進(jìn)行傳代。2.將BMSCs消化,離心后按每孔約5×10⁴個(gè)細(xì)胞,接入細(xì)胞培養(yǎng)板。待細(xì)胞融合達(dá)70%-80%時(shí),進(jìn)行衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色。顯微鏡下采集圖像對(duì)衰老細(xì)胞計(jì)數(shù),檢測(cè)細(xì)胞衰老特征。3.將BMSCs消化,離心后按每孔約2×10⁴個(gè)細(xì)胞接入12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,待細(xì)胞融合達(dá)60%-70%更換成骨誘導(dǎo)液,每三天換液一次,連續(xù)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)14d后,行茜素紅染色,通過(guò)鈣結(jié)節(jié)形成能力來(lái)檢測(cè)細(xì)胞成骨特征。4.通過(guò)定量Real-time PCR檢測(cè)目的基因Jmjd3,p21,p16在兩種BMSCs中的表達(dá)。5.通過(guò)Western Blot檢測(cè)BMSCs中Jmjd3,p21,p16... 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠頜骨缺損手術(shù)以及細(xì)胞與支架移植過(guò)程

南京醫(yī)科大結(jié) 果MSCs 和 M-BMSCs 的體外衰老和成骨特征穩(wěn)定的第五代的大鼠 M-BMSCs 和 T-BMSCs 進(jìn)行 SA-β-成藍(lán)色的陽(yáng)性細(xì)胞體積增大，扁平，核大深染，胞質(zhì)空泡例為（35.33±4.18）%，明顯高于 M-BMSCs 組的（21.將第五代 M-BMSCs 和 T-BMSCs 成骨誘導(dǎo) 14 d 后進(jìn)行示 M-BMSCs 組的鈣結(jié)節(jié)的數(shù)量明顯多于 T-BMSCs 組，.79±0.22、2.78±0.36，差異具有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.05）。說(shuō)與四肢骨來(lái)源的 BMSCs 相比，具有更強(qiáng)的抗衰老能力和AM-BMSCs T-BMSCs

A：衰老染色（ 200）；B：Western blot 檢測(cè)圖 4 敲減 Jmjd3 提高 T-BMSCs 的抗衰老能Fig.4 Inhibition of Jmjd3 promotes the ability of anti-senesce4．移植敲減 shJmjd3 的 T-BMSCs 有利于骨修復(fù)BMSCs 移植 6 周后，Micro-CT 觀察新骨的形成情況，移植區(qū)的 BMD 和 BV/TV。結(jié)果顯示，M-BMSCs 組比 T-多的骨小梁結(jié)構(gòu)；與 GFP-T-BMSCs 組相比，shJmjd3-T-BM量形成（圖 5）。Masson 三色染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，M-BMSCs 組成更多骨膠原纖維；與 GFP-T-BMSCs 組相比，shJmjd3-T原纖維更多（圖 6）。定量分析結(jié)果顯示，M-BMSCs 組 BM成率高于 T-BMSCs 組（P<0.05），shJmjd3-T-BMSCs GFP-T-BMSCs 組（P<0.05）（表 2）。這些結(jié)果提示，移植有利于 BMSCs 修復(fù)骨缺損。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3527174