目的:針對不同胚源的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）表現(xiàn)出的衰老差異,探討組蛋白去甲基化酶Jmjd3對衰老的調(diào)控作用。方法:1.體外提取大鼠下頜骨（mandibular,M）和脛骨（tibia,T）的BMSCs,全骨髓貼壁培養(yǎng)并進行傳代。2.將BMSCs消化,離心后按每孔約5×10⁴個細胞,接入細胞培養(yǎng)板。待細胞融合達70%-80%時,進行衰老相關β-半乳糖苷酶（Senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色。顯微鏡下采集圖像對衰老細胞計數(shù),檢測細胞衰老特征。3.將BMSCs消化,離心后按每孔約2×10⁴個細胞接入12孔細胞培養(yǎng)板中,待細胞融合達60%-70%更換成骨誘導液,每三天換液一次,連續(xù)成骨誘導培養(yǎng)14d后,行茜素紅染色,通過鈣結節(jié)形成能力來檢測細胞成骨特征。4.通過定量Real-time PCR檢測目的基因Jmjd3,p21,p16在兩種BMSCs中的表達。5.通過Western Blot檢測BMSCs中Jmjd3,p21,p16... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠頜骨缺損手術以及細胞與支架移植過程

南京醫(yī)科大結 果MSCs 和 M-BMSCs 的體外衰老和成骨特征穩(wěn)定的第五代的大鼠 M-BMSCs 和 T-BMSCs 進行 SA-β-成藍色的陽性細胞體積增大，扁平，核大深染，胞質(zhì)空泡例為（35.33±4.18）%，明顯高于 M-BMSCs 組的（21.將第五代 M-BMSCs 和 T-BMSCs 成骨誘導 14 d 后進行示 M-BMSCs 組的鈣結節(jié)的數(shù)量明顯多于 T-BMSCs 組，.79±0.22、2.78±0.36，差異具有統(tǒng)計意義（P<0.05）。說與四肢骨來源的 BMSCs 相比，具有更強的抗衰老能力和AM-BMSCs T-BMSCs

A：衰老染色（ 200）；B：Western blot 檢測圖 4 敲減 Jmjd3 提高 T-BMSCs 的抗衰老能Fig.4 Inhibition of Jmjd3 promotes the ability of anti-senesce4．移植敲減 shJmjd3 的 T-BMSCs 有利于骨修復BMSCs 移植 6 周后，Micro-CT 觀察新骨的形成情況，移植區(qū)的 BMD 和 BV/TV。結果顯示，M-BMSCs 組比 T-多的骨小梁結構；與 GFP-T-BMSCs 組相比，shJmjd3-T-BM量形成（圖 5）。Masson 三色染色檢測發(fā)現(xiàn)，M-BMSCs 組成更多骨膠原纖維；與 GFP-T-BMSCs 組相比，shJmjd3-T原纖維更多（圖 6）。定量分析結果顯示，M-BMSCs 組 BM成率高于 T-BMSCs 組（P<0.05），shJmjd3-T-BMSCs GFP-T-BMSCs 組（P<0.05）（表 2）。這些結果提示，移植有利于 BMSCs 修復骨缺損。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3527174