目的:探討體外聯(lián)合應用VEGF和PDGF-BB兩種細胞生長因子對骨髓間充質(zhì)干細胞增殖及成血管不同階段相關基因指標mRNA表達量的影響,為優(yōu)化組織工程干細胞提供理論依據(jù)。方法:體外分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,根據(jù)分組:VEGF組、PDGF-BB組、VEGF+PDGF-BB組及對照組,分別用不同濃度VEGF（0、20、40、60、80、100、120 ng/mL）和PDGF-BB（0、20、40、60、80、100、120 ng/mL）單獨或聯(lián)合干預BMSCs,連續(xù)7天檢測細胞增殖能力,確定最佳促細胞增值濃度。使用最佳促細胞增殖濃度,根據(jù)分組干預BMSCs 7天和14天后,提取RNA、逆轉(zhuǎn)錄、RT-PCR檢測四組細胞Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF成血管基因的表達量。結果:（1）加入生長因子后,細胞增殖能力明顯提高,單獨作用效果不如聯(lián)合作用的效果,最佳濃度組組合為:80 ng/mL VEGF+80 ng/mL PDGF-BB。（2）mRNA表達水平,在第7天及第14天這兩個檢測點,除了對照組,其他三組Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF基因指標的mRNA表達均明顯上調(diào),差... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代第3天、原代第7天、第一代、第二代、第三代骨髓間充質(zhì)干細胞細胞形態(tài)圖（×5）

加入生長因子干預7天后各組細胞形態(tài)圖（×5）

新疆醫(yī)科大學碩士學位論文22樣，每管為20μL體系。上普通PCR機，按照產(chǎn)品說明書程序設置，擴增目的基因，大約47min后擴增結束。吸取得到的產(chǎn)物5μL用于后續(xù)凝膠電泳實驗。（2）凝膠電泳：制膠、電泳方法同前。Rat大鼠Ang-1、Hif-1α、HGF、IGF基因引物片段大小分別為165bp、146bp、162bp、156bp。因此，我們最終選擇Maker600用于凝膠電泳標記引物片段大小，連接好電泳系統(tǒng)后，聯(lián)通電源，開始電泳，大概15-25min左右，條帶即可跑到制膠板的中央。去除膠塊，上凝膠成像拍照系統(tǒng)拍照，得到的結果顯示用maker標尺，凝膠電泳各基因片段的表達條帶與最初引物設計長度完全相符，且條帶較亮且均勻。結果見圖5。圖5引物準確性和特異性的檢驗Fig.5Testoftheaccuracyandspecificityofprimers4.3實時熒光定量RT-PCR結果分析利用普通PCR儀，通過Touchdown實驗方法，確定最佳退火溫度及最佳延伸時間，利用最佳條件進行RT-PCR反應。在對熒光定量PCR結果分析時，一般需要看三個地方：基線、CT值和溶解曲線�；�是指在熒光定量PCR反應最初，熒光信號變化不大，幾乎接近是一條直線。一般情況下，CT值越小說明起始拷貝數(shù)越大。CT值代表了每個PCR反應管到達程序設置的熒光信號值時所需要經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。而溶解曲線則在一定程度上代表了擴增產(chǎn)物的特異性，若溶解曲線圖是單峰，那么引物特異性高。RT-PCR結果見圖6-9。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]非病毒載體介導的基因治療在骨缺損修復中的研究進展[J]. 任超,周諾.  實用醫(yī)學雜志. 2019(12)
[2]復合富血小板血漿的自體骨移植聯(lián)合體外沖擊波治療骨不連[J]. 儲偉.  中國骨傷. 2019(05)
[3]脂質(zhì)體和慢病毒介導P75神經(jīng)生長因子受體及神經(jīng)生長因子轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞的效果比較[J]. 朱倫井,貝朝涌,段江濤,彭稱飛,馬躍剛,王寧,陳俊毅.  中國組織工程研究. 2019(21)
[4]自體牙骨移植材料在牙槽骨缺損修復中的應用進展[J]. 李冀寅,賀平.  口腔醫(yī)學研究. 2019(03)
[5]血小板膠-膠原生物活性復合膜修復大鼠牙周骨組織缺損[J]. 張旭鳳,符起亞,鄭根建,郭玉蘇,陳丹宇,符方滿,吳慧,王琳.  中國組織工程研究. 2019(14)
[6]Ubiquitin-specific protease 22 enhances intestinal cell proliferation and tissue regeneration after intestinal ischemia reperfusion injury[J]. An-Long Ji,Tong Li,Guo Zu,Dong-Cheng Feng,Yang Li,Guang-Zhi Wang,Ji-Hong Yao,Xiao-Feng Tian.  World Journal of Gastroenterology. 2019(07)
[7]VEGF/PELA/bFGF混合微囊促進大鼠BMSCs成血管分化研究[J]. 趙勝利,殷杰,于慶賀,張國煒,閔少雄.  中國修復重建外科雜志. 2019(02)
[8]間充質(zhì)干細胞相關生長因子在牙槽骨修復的應用進展[J]. 金曉明,陶海彪,江銀華.  口腔醫(yī)學. 2019(01)
[9]超順磁性殼聚糖明膠微球作為緩釋基因載體的磁轉(zhuǎn)染及釋放[J]. 岑超德,張永,羅聰,楊曉蘭,鄔均,吳聲忠,劉福堯.  中國組織工程研究. 2019(02)
[10]組織工程骨血管化中種子細胞的研究進展[J]. 趙勝利,史本超,高�；�,胡攀勇,于慶賀,閔少雄.  醫(yī)學綜述. 2018(20)



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