目的 探索鈣調(diào)蛋白依賴性激酶Ⅱδ（CaMKⅡδ）基因沉默對破骨細(xì)胞分化、骨吸收功能的影響以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ調(diào)控破骨細(xì)胞分化中的作用,以揭示破骨細(xì)胞分化調(diào)控的分子機(jī)制。方法 1、CaMKⅡδRNA干擾效率的測定。構(gòu)建CaMKⅡδ RNA干擾載體;將小鼠RAW264.7細(xì)胞分為空白組、陰性載體組和干擾載體組;后兩組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染陰性載體病毒和干擾載體病毒;病毒轉(zhuǎn)染12h后,換新鮮完全培養(yǎng)基,加入核因子-κB受體活化因子配體（RANKL）誘導(dǎo);5天后收獲細(xì)胞,提三組細(xì)胞的RNA進(jìn)行Real-time PCR檢測CaMKⅡδ的mRNA表達(dá)水平,提取三組細(xì)胞總蛋白進(jìn)行Western-blotting檢測CaMKⅡδ蛋白水平。2、TRAP染色檢測沉默CaMKⅡ δ基因?qū)ζ乒羌?xì)胞分化的影響,牛骨吸收陷窩檢測沉默CaMKⅡδ對破骨細(xì)胞吸收功能的影響。方法是使用慢病毒分別轉(zhuǎn)染陰性載體組、干擾載體組12小時,之后用50ng/ml RANKL誘導(dǎo)5天后收獲,并完成上述檢測。3、CaMKⅡδ基因沉默對c-fos、c-jun、CREB表達(dá)的影響。細(xì)胞處理方法同前,RANKL誘導(dǎo)... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RAW264.7細(xì)胞（倒置相差顯微鏡，×100）

第 1 章 實(shí)驗(yàn)研究mRNA 相對表達(dá)水平分別為 1.282±0.234、0.950±0.275、0.377±0.148（（表 3）；空白組與陰性載體組之間無顯著性差異（P>0.05），而干擾載白組下降了 70.6%（P<0.01），即 mRNA 干擾效率為 70.6 %（圖 2）。表 3 定量分析三組細(xì)胞中 CaMKⅡδ mRNA 表達(dá)水平 （n=3, x ± s）Table3 Quantitative analysis of CaMKⅡδ mRNA level among the three grouby Real-time PCR（n=3, x ± s）組別 平均相對濃度 F 空白組陰性載體組干擾載體組1.282±0.2340.950±0.2750.377±0.14812.341

圖 3 Western-blotting 檢測各組細(xì)胞 CaMKg.3 Detection of CaMKⅡδ protein in cells amongIIδ基因沉默對破骨細(xì)胞生成及吸收功能的胞，觀察三組均出現(xiàn)了陽性的多核破骨細(xì)較多、體積較大的是空白組和陰性載體組載體組，定量數(shù)據(jù)表明干擾載體組中 TTRAP+破骨細(xì)胞數(shù)目 12.7±2.49、陰性載干擾載體組較空白組、陰性載體組明顯異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）�？瞻捉M和結(jié)果表明，CaMKIIδ基因沉默可顯著抑制過 SEM 觀察三組骨磨片上骨吸收陷窩形白組吸收陷窩的數(shù)目及面積分別為 10±2 為 12±1.23 和 5247±635.24 μm2、 干

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3472997