目的（1）克隆人癌胚抗原（carcinoembryonic antigen）基因片段,構(gòu)建pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）檢測其在人舌癌Tca8113細(xì)胞株（human tongue squamous cell carcinoma cell line8113,Tca8113）中的表達(dá)。方法（1）采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù),從人結(jié)腸癌組織中擴(kuò)增出人CEA基因片段,通過DNA重組技術(shù)將該基因片段重組于pcDNA3.1真核表達(dá)載體上,構(gòu)建成pcDNA3.1-CEA基因疫苗。（2）通過用酶切、PCR擴(kuò)增電泳分析及DNA測序的方法對重組DNA進(jìn)行鑒定。（3）轉(zhuǎn)染人舌癌Tca8113細(xì)胞,以轉(zhuǎn)染空載體組做實驗對照組,以未轉(zhuǎn)染的舌癌細(xì)胞作空白對照組,通過RT-PCR和免疫組化檢測其在人舌癌Tca8113細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果（1）經(jīng)酶切、PCR擴(kuò)增電泳分析和DNA測序證實,本實驗構(gòu)建的重組質(zhì)粒目的基因片段為人CEA-cDNA。（2）經(jīng)RT-PCR和免疫組化證實:與實驗對照組和空白對照組相比較,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CEA后的人舌癌Tca8113細(xì)胞內(nèi)CEA mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

總RNA電泳

1 2 DL2000CEA 真核表達(dá)載體的鑒定pcDNA3.1-CEA的酶切電泳鑒定:粒經(jīng)EcoRI\XhoI雙酶切電泳后,出現(xiàn)了2.1kbpEAcDNA產(chǎn)物，5.4kbp為pcDNA3.1線狀質(zhì)粒圖2 RT-PCR產(chǎn)物電泳質(zhì)量 DL2000 Marker，1 為擴(kuò)增的特異條帶(2.1kbp)，2 為陰

3.1 重組質(zhì)粒pcDNA3.1-CEA的酶切電泳鑒定:重組質(zhì)粒經(jīng)EcoRI\XhoI雙酶切電泳后,出現(xiàn)了2.1kbp和5.4kbp兩條帶（2.1kbp為CEAcDNA產(chǎn)物，5.4kbp為pcDNA3.1線狀質(zhì)粒）(圖3)。1 2 3 4 5 6圖 3.1 重組質(zhì)粒 pcDNA3.1-CEA 雙酶切電泳圖譜圖2 RT-PCR產(chǎn)物電泳M 為相對分子質(zhì)量 DL2000 Marker，1 為擴(kuò)增的特異條帶(2.1kbp)，2 為陰性對照圖3 重組質(zhì)粒pcDNA3.1- CEA雙酶切電泳1 為相對分子質(zhì)量 1kbp DNA Ladder Marker，2、3、4、5、6 為雙酶切產(chǎn)物5.4kb(pcDNA3.1)和 2.1kb（CEA）1000bp750bp500bp2.1kbp10000bp6000bp2000bp1500bp1000bp5

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白細(xì)胞介素2和15基因?qū)滤_奇病毒VP1 DNA疫苗誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的影響[J]. 房文亮,李澤民,揣俠,王永祥,金玉懷.  臨床心血管病雜志. 2005(01)
[2]IL-18和HIV-1gag-gp120嵌合基因DNA疫苗聯(lián)合免疫小鼠的免疫應(yīng)答[J]. 江文正,金寧一,李子健,張立樹,王宏,金洪濤.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2004(04)
[3]IL-15通過ERK1/2信號途徑對NK細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)[J]. 梁淑娟,孫汭,魏海明,孫安源,張建華,田志剛.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2003(02)
[4]新城疫病毒HN基因?qū)δ[瘤抗原誘導(dǎo)的抗腫瘤免疫的增強(qiáng)作用[J]. 魏林,戴建新,傅傳剛,孫樹漢.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2001(06)
[5]口腔頜面部惡性腫瘤病人可溶性白介素2受體的檢測[J]. 王代友,歐子民.  臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志. 1997(04)



本文編號：3467050