目的:研究Notch4信號通路對口腔鱗癌PJ15和PJ41細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cell,CSC）自我更新能力的影響及其作用機(jī)制。方法:利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析Notch4基因在頭頸部腫瘤中的表達(dá)。2μmol/L順鉑處理口腔鱗癌PJ15和PJ41細(xì)胞48 h,再加入Notch通路抑制劑DAPT作用24 h,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CSC比例,Western blotting法和qPCR法檢測CSC標(biāo)志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4信號通路中的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、HES2、DLL4等）的表達(dá)。采用siRNA技術(shù)敲降Notch4,Western blotting法和q PCR法檢測si-Notch4和順鉑對CSC標(biāo)志物表達(dá)水平的影響,干細(xì)胞成球?qū)嶒灆z測CSC的自我更新能力。結(jié)果:頭頸部腫瘤組織中Notch4基因呈高表達(dá)（P=0.046）。順鉑處理后,PJ15和PJ41細(xì)胞中NICD4和CSC標(biāo)志物（Sox2、Bmi-1、Oct4、Nanog）和Notch4信號通路的下游基因（JAG1、HEY1、HEY2、HES1、H... 

【文章來源】：中國腫瘤生物治療雜志. 2020,27(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同濃度順鉑作用48 h對PJ15、PJ41細(xì)胞活力的影響

圖5 DAPT下調(diào)PJ15和PJ41 CSC特異性標(biāo)志物和Notch通路下游基因的表達(dá)為了進(jìn)一步闡明Notch4信號通路對口腔鱗癌干細(xì)胞自我更新的作用，我們進(jìn)行了驗證腫瘤干細(xì)胞增殖能力的成球?qū)嶒�。結(jié)果（圖6C）顯示，與對照組相比，si-Notch4組PJ15細(xì)胞[（1.33±0.47)vs(8.00±0.82）個，P<0.01]和PJ41細(xì)胞[（1.00±0.82)vs(7.67±1.25）個，P<0.01]球體的數(shù)量和大小均顯著低于對照組，提示Notch4信號通路可以調(diào)控CSC的自我更新。

為驗證Notch4信號通路在口腔鱗癌干細(xì)胞中的作用，敲降Notch4后加入2μmol/L DDP作用24 h,WB實驗檢測結(jié)果（圖6A）顯示，si-Notch4組與對照組相比，CSC特異性基因Nanog和Bmi-1表達(dá)量無顯著差異。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果（圖6B）顯示，si-Notch4組中CSC比例升高幅度小于對照組，這進(jìn)一步提示Notch4信號通路參與了CSC的自我更新。圖3 使用TCGA數(shù)據(jù)集比較Notch通路相關(guān)基因在正常組與腫瘤組間的表達(dá)情況


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