目的:探討脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）對棕櫚酸（palmitic acid,PA）誘導(dǎo)的脂質(zhì)沉積的肝細(xì)胞增殖、凋亡以及炎性因子分泌的影響并初步闡明氧化物酶體增殖劑激活受體-δ（Peroxisome proliferator-activated receptor delta,PPARδ）在該過程中的作用和機制。方法:（1）采用不同濃度棕櫚酸（palmitic acid,PA）處理L02細(xì)胞,構(gòu)建NAFLD細(xì)胞模型。通過細(xì)胞增殖與毒性實驗觀察各處理組的細(xì)胞存活率;油紅O染色觀察各處理組細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積情況;游離脂肪酸（free fatty acid,FFA）定量實驗檢測各處理組FFA的分泌情況;Annexin V-FITC/PI雙染法、流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率;Hoechst 33342熒光染色觀察各組細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化;（2）將不同濃度的LPS加入PA處理的NAFLD細(xì)胞模型中,構(gòu)建牙周炎引起的全身LPS水平增高的NAFLD細(xì)胞模型。通過細(xì)胞增殖與毒性實驗觀察各處理組的細(xì)胞存活率;油紅O染色觀察各處理組細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)沉積情況;FFA定量實驗檢測各處理組FF... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度棕櫚酸對L02細(xì)胞存活率的影響（*P＜0.05）

大學(xué)碩士學(xué)位論文 LPS 對 PA 誘導(dǎo)的脂質(zhì)沉積的肝細(xì)胞的影響及作用和機制的體外研究凋亡形態(tài)學(xué)變化（圖 2.2），并隨濃度增加而增加。圖 2.2A 示，對橢圓形，著色均勻，有個別凋亡小體。圖 2.2B 示，0.2mM 組細(xì)胞減少，細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞核形狀不規(guī)則，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞核碎裂，等典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。0.4mM 組（圖 2.2C）和 0.8mM（圖量較對照組明顯減少，大多數(shù)細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞核形狀不規(guī)則，細(xì)胞碎裂，凋亡小體形成等典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。

圖 2.3 棕櫚酸處理 L02 細(xì)胞 24h 的流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果。（A）對照組。（B）0.2mM 棕櫚酸處理 L02 細(xì)胞。（C）0.4mM 棕櫚酸處理 L02 細(xì)胞。（D）0.8mM 棕櫚酸處理 L02 細(xì)胞。（E）各組細(xì)胞凋亡細(xì)胞率的統(tǒng)計圖（與對照組相比，*P<0.05）。Figure 2.3 Flow Cytometry results of L02 cells with the treatment of palmitic acid for 24h. (A)Control group. (B) L02 cellswere incubated with 0.2mM palmitic acid. (C) L02 cellswereincubated with 0.4mM palmitic acid. (D) L02 cellswere incubated with 0.8mM palmitic acid. (E)Both early and late apoptotic cells were calculated as the incidence of apoptotic celldeath(compared with the control group,*P＜0.05).2.3.3 棕櫚酸對 L02 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及游離脂肪酸分泌的影響采用油紅 O 染色測定觀察不同濃度棕櫚酸處理 L02 細(xì)胞 24h 后細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積情況。將濃度為 0.2mM、0.4mM、0.8mM 的棕櫚酸加入到 L02 細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng) 24h 后結(jié)果如圖 2.4。對照組（圖 2.4A）細(xì)胞呈圓三角形，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)呈淡藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)中有少量橘紅色脂滴。0.2mM 組（圖 2.4 B）出現(xiàn)呈藍(lán)黑色深染的凋亡小體，細(xì)胞數(shù)量較對照組減少，細(xì)胞質(zhì)中橘紅色脂滴沉積較對照組增多。0.4mM 組（圖 2.4C）細(xì)胞數(shù)量較對照組和 0.2mM

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pediatric non-alcoholic fatty liver disease: Recent solutions, unresolved issues, and future research directions[J]. Maria Grazia Clemente,Claudia Mandato,Marco Poeta,Pietro Vajro.  World Journal of Gastroenterology. 2016(36)
[2]Gut-liver axis and probiotics: Their role in non-alcoholic fatty liver disease[J]. Giulia Paolella,Claudia Mandato,Luca Pierri,Marco Poeta,Martina Di Stasi,Pietro Vajro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(42)
[3]Role of gut microbiota and Toll-like receptors in nonalcoholic fatty liver disease[J]. Kouichi Miura,Hirohide Ohnishi.  World Journal of Gastroenterology. 2014(23)



本文編號：3426159