牙髓炎是口腔最常見的疾病之一，研究表明感染性牙髓炎主要的致病菌是G^-菌，而內毒素（lipopolysaccharide,LPS）是主要的毒力因子。實驗研究發(fā)現(xiàn)，LPS能誘導單核-巨噬細胞、成纖維細胞等細胞分泌多種炎癥細胞因子如IL-1、IL-6、IL-8等，產(chǎn)生炎癥級聯(lián)反應，導致血管通透性增加、牙髓腔內滲液增多、髓腔壓力增大，從而引起牙髓炎癥狀。因此研究拮抗LPS的治療措施，降低LPS對牙髓細胞的毒性作用，對牙髓炎的防治和活髓的保存具有重要意義。 葛佬素（Gloverin）是一種存在于蠶蛹中的抗菌肽，分子量為13.8KD。該蛋白可結合LPS，阻斷LPS的生物學效應，是一種具有殺滅G^-菌、中和LPS雙重作用的抗菌肽。雖然本實驗室前期將葛佬素在非洲綠猴腎細胞株COS-7中進行了表達，同時證明該表達產(chǎn)物具有殺滅大腸桿菌J5的作用，但是由于葛佬素在COS-7細胞中表達量還很低，遠不能滿足科研及臨床應用的需要，因此利用原核表達系統(tǒng)表達具有生物活性的重組葛佬素多肽，成為獲得大量葛佬素以及進一步研究其生物學效應的一種選擇。 本研究目的即在采用基... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

以質粒pBzHG為模板擴增葛佬素基因1.PCRmarker;2PCRfragmentofGloverin.

瓊脂糖凝膠電泳，結果表明重組子由兩條分子量約為390bp及3530bp的DNA片段構成，符合目的DNA及載體片段分子量的大小，提示為陽性重組質粒(圖2)。23353DbP39ObP圖2重組質粒的酶切鑒定l入DNA/Hindlllmarker;2PCRmarker;3Plasmidsdouble一digestedbySrnal+Neol;F192IdentificationofthePlasmidbyrestrietionenzymedigestion29

PIVEX2.3表達對照組，在14KD附近未見明顯的蛋白條帶，提示PIVEX2.3一G組的RTS500表達產(chǎn)物中含有有大量的與葛佬素蛋白分子量一致的蛋白。(圖4)239740066200427003100014400圖4葛佬素蛋白的體外表達1standardproteinmarkers;2PIVEX2.3一G:3negativeeontrol(PIVEX2.3)Fig4ExPressionofrecombinantgloverinbyRTS50O

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3420357