研究目的:口腔鱗狀細(xì)胞癌被世界衛(wèi)生組織提為,世界排名第六的惡性腫瘤,作為易發(fā)腫瘤,因侵襲性強(qiáng)、轉(zhuǎn)移率高的特點(diǎn),導(dǎo)致其患者預(yù)后極差甚至危及生命。近年來,對(duì)于侵入鄰近組織、發(fā)生轉(zhuǎn)移的口腔鱗狀細(xì)胞癌患者的死亡率尚無顯著改善^[1]。所以亟需進(jìn)一步研究口腔鱗狀細(xì)胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制,以延長(zhǎng)患者的生存期。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞作為腫瘤微環(huán)境中的主要免疫細(xì)胞亞群之一,在腫瘤微環(huán)境中主要極化為兩種表型,M1型和M2型。其中M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可以促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,另外,腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過分泌多種細(xì)胞因子,如IL-6、IL-10、IL-12等也可以影響腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移^[2]。研究表明ENO1是糖酵解過程中的一種α-烯醇化酶,是催化糖酵解途徑中2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)化為磷酸烯醇丙酮酸的金屬酶。它是一種多功能糖酵解酶,參與各種重要的生理過程,如細(xì)胞應(yīng)激、癌癥的發(fā)生和轉(zhuǎn)移^[3]。研究發(fā)現(xiàn)ENO1在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織和細(xì)胞上高表達(dá),并且可以通過糖酵解產(chǎn)生的ATP促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移,抑制腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展,但ENO1在口腔鱗狀細(xì)胞癌的具體機(jī)制尚未完... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

siRNA轉(zhuǎn)染CAL27細(xì)胞后ENO1的表達(dá)

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果23重復(fù)3次；**，P<0.01；***，P<0.001。使用ENO1的siRNA轉(zhuǎn)染CAL27細(xì)胞36h提取總RNA，進(jìn)行Real-timePCR檢測(cè)基因表達(dá)水平，另一組實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染進(jìn)行48h后，提取蛋白進(jìn)行Westernblot檢測(cè)ENO1蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示：與對(duì)照組相比，基因水平顯示，在CAL27細(xì)胞中siRNA1、siRNA2、siRNA3的表達(dá)量下降約65%左右；蛋白水平顯示，在CAL27細(xì)胞中siRNA1、siRNA2的表達(dá)量下降約40%、30%。該組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，siRNA下調(diào)CAL27細(xì)胞的ENO1的表達(dá)成功。且siRNA1號(hào)效率最高，該實(shí)驗(yàn)后續(xù)均使用siRNA1干擾CAL27細(xì)胞的ENO1的表達(dá)。3.3轉(zhuǎn)染ENO1的siRNA后對(duì)CAL27細(xì)胞侵襲的影響NCsiRNA圖3.3CAL27細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA后對(duì)其侵襲的影響Fig.3.3EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAontheirinvasionability注：每次實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次；***，P<0.001。上室鋪膠后，用5%血清的培養(yǎng)基孵育的CAL27細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組下室RAW264.7細(xì)胞提前加入siRNA轉(zhuǎn)染的CAL27細(xì)胞上清誘導(dǎo)，然后更換為10%血清的培養(yǎng)基。上室和下室共作用48h后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定染色，計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與NC組相比，轉(zhuǎn)染siRNA組CAL27細(xì)胞穿過小室的數(shù)量明顯減少（***，P<0.001），實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，ENO1的表達(dá)降低后，可以顯著減弱CAL27細(xì)胞的侵襲能力。

第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果243.4轉(zhuǎn)染ENO1的siRNA后對(duì)CAL27細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響NCsiRNA圖3.4CAL27細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA后對(duì)其轉(zhuǎn)移的影響Fig.3.4EffectofCAL27cellstransfectionwithsiRNAonitsmigration注：每次實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次；**，P<0.01。上室不處理，用5%血清的培養(yǎng)基孵育的CAL27細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組下室RAW264.7細(xì)胞提前加入siRNA轉(zhuǎn)染的CAL27細(xì)胞上清誘導(dǎo)，然后更換為10%血清的培養(yǎng)基。上室和下室共作用24h后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定染色，計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與NC組相比，轉(zhuǎn)染siRNA組CAL27細(xì)胞穿過小室的數(shù)量明顯減少（**，P<0.01），結(jié)果說明，ENO1的表達(dá)降低后，可以顯著減弱CAL27細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。3.5外源性ENO1蛋白對(duì)CAL27細(xì)胞侵襲的影響ControlENO1圖3.5外源性ENO1蛋白對(duì)CAL27細(xì)胞侵襲的影響Fig.3.5EffectofENO1ontheinvasiveabilityofOSCC注：每次實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次；**，P<0.01。上室鋪膠后，用5%血清的培養(yǎng)基孵育的CAL27細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組下室RAW264.7細(xì)胞提前用CAL27細(xì)胞上清加入外源性ENO1蛋白誘導(dǎo)，然后更換為10%血清的培養(yǎng)基。上室和下室共同作用48h后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定染色，計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與Control組比較，加入外源性重組ENO1蛋白組，CAL27細(xì)胞穿過小室的數(shù)量明顯增多（**，P<0.01），結(jié)果說明，ENO1的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA在腫瘤免疫中的作用：對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的功能調(diào)控（英文）[J]. Chong CHEN,Jia-ming LIU,Yun-ping LUO.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2020(01)



本文編號(hào)：3418877