目的:研究腫瘤壞死因子-α對牙周膜干細(xì)胞骨向分化及Notch信號通路的影響,初步探討在腫瘤壞死因子-α影響下Notch信號通路對牙周膜干細(xì)胞成骨分化的調(diào)控作用。方法:采用酶消化聯(lián)合組織塊法獲取牙周膜干細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀檢測間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物CD105、CD90、CD146、CD45、CD31的表達(dá),將牙周膜干細(xì)胞分為實驗組（腫瘤壞死因子-α濃度為1Ong/ml）和對照組（腫瘤壞死因子-α濃度為Ong/ml）,使用CCK-8法檢測牙周膜干細(xì)胞增殖能力;通過堿性磷酸酶活性實驗、茜素紅染色實驗、實時定量PCR實驗,檢測腫瘤壞死因子-α對牙周膜干細(xì)胞成骨能力的影響;實時定量PCR檢測Notch信號通路受體Notchl、Notch2、Notch3;配體JAG1、JGA2、DLL1;細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)分子Hes-1的表達(dá)。結(jié)果:流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示CD105、CD90及CD146表達(dá)陽性,CD45、CD31表達(dá)陰性;CCK-8法結(jié)果顯示腫瘤壞死因子-α能夠促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞增殖能力（P<0.05）:堿性磷酸酶活性結(jié)果顯示,實驗組與對照組相比,堿性磷酸酶活性降低（P<0.05）;茜素紅染色... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞儀細(xì)胞表型鑒定結(jié)果

原代ＰＤＬＳＣｓ培養(yǎng)至第３天可見有細(xì)胞從組織邊緣爬出（附錄圖１），繼續(xù)培養(yǎng)??至第８天組織周圍細(xì)胞匯合至８０％？９０％時，即可傳代，細(xì)胞傳至第３代時細(xì)胞輪??廓清晰，形態(tài)單一，均呈長梭型，生長狀態(tài)良好（附錄圖２）。??２?ＰＤＬＳＣｓ流式分子鑒定??流式細(xì)胞鑒定ＰＤＬＳＣｓ的結(jié)果，從左至右依次為ＣＤ１０５ＣＤ３１；?ＣＤ９０ＣＤ４５；??ＣＤ１４６；?ＢＬＡＮＫ，其中ＣＤ１０５和ＣＤ９０陽性率為９０％及９５．６％，ＣＤ１４６陽性率為??１７°／。，ＣＤ３１?及?ＣＤ４５?陽性率為?０．６％及?０．７％?（圖?１?）。??：，．，Ｕ：．．．．．晨—，－氣」???Ｍ｜?１０＊０１０＊?１０＊?１０＊?ｔｏ＊?ｆ?＾?〇?１０２?｜〇３?１０＊?｜〇＊?Ｄ?？〇ａ?ｌｆｌＪ?＼０＊?１０＊?０?Ｉｆｔ＊?ｔｏＪ?�。埃�?１０＊??圖１流式細(xì)胞儀細(xì)胞表型鑒定結(jié)果??Ｆｉｇ．ｌ?Ｃｅｌｌ?ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ＦＡＣＳ??３?ＰＤＬＳＣｓ實驗組與對照組細(xì)胞增殖能力比較??連續(xù)７天的ＣＣＫ－８實驗結(jié)果顯示（表３、圖２），ｗｊ？以看出細(xì)胞經(jīng)歷了潛伏期，快??速生長期，緩慢生長期，第１？３ｄ為潛伏期，４？５?ｄ為快速生長期，細(xì)胞數(shù)量呈對數(shù)??增長

成骨誘導(dǎo)液連續(xù)培養(yǎng)２１天后，茜素紅染色顯示實驗組與對照組均有礦化結(jié)節(jié)生??成，與實驗組（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）相比，對照組（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ｏｃ）礦化結(jié)節(jié)染色較深、??數(shù)量多且形成的范圍較廣泛（附錄圖３），而實驗組（ｌＯｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）結(jié)節(jié)染色淺、??數(shù)量少且范圍較小（附錄圖４）。??４．?２?ＡＬＰ活性檢測實驗結(jié)果比較??實驗組與對照組分別于１、３、５、７天，終止礦化，分別檢測ＡＬＰ活性，結(jié)果顯??示（表４、圖３），實驗組ＰＤＬＳＣｓ與對照組ＰＤＬＳＣｓ?ＡＬＰ活性均逐漸增加，同時實驗??組（１０ｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓＡＬＰ表達(dá)明顯低于對照組（Ｏｎｇ／ｍＬＴＮＦ－ａ）?ＰＤＬＳＣｓ，??差異具有統(tǒng)計學(xué)意義〇Ｐ＜〇．〇５）。??表４實驗組與對照組堿性磷酸酶的活性（ＯＤ，無±ｘ）??Ｔａｂｌｅ?４?Ａｌｋａｌｉｎｅ?ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ?ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｏｆ?ＰＤＬＳＣｓ?ｉｎ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ??（ＯＤ，?ｘ±ｓ）??培養(yǎng)時間（天／ｄ）??組別????１３?５?７??對照組?０．０１２土０．００１?０．０１７土０．００２?０．０３４±０．００１?０．０５８±０．００２??實驗組?０．００８±０．００３?０．０１６土０．００１?０．０２０士０．００１?０．０２９±０．００５??／?值?１０．４９１?１０．１９７?２６．５６１?２８．１０５??尸值?０．００１?０．００１?０．００１?０．００１??１８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]TNF-α對牙周膜干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和成骨分化及骨創(chuàng)傷修復(fù)影響的研究[D]. 黃海云.山東大學(xué) 2012
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碩士論文
[1]低氧對人牙髓干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[D]. 劉慶娜.南方醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]DLL1在BMP9誘導(dǎo)MSCs成骨分化的作用及機(jī)制研究[D]. 楊倫韻.重慶醫(yī)科大學(xué) 2015
[3]成骨細(xì)胞應(yīng)力學(xué)效應(yīng)中Notch信號及其關(guān)鍵因子APH1作用機(jī)制的研究[D]. 李欣.山東大學(xué) 2013



本文編號：3395738