研究目的:利用天然牙本質(zhì)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）向成牙本質(zhì)細胞樣細胞分化,為尋找新的牙齒組織再生的種子細胞來源以及實現(xiàn)牙髓病由傳統(tǒng)的物理充填治療向生物學(xué)治療轉(zhuǎn)變提供理論依據(jù)。研究方法:通過全骨髓貼壁法獲取大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并對其組織來源及多向分化能力進行初步鑒定,并取第3 5代細胞用于后續(xù)實驗。體外實驗:取1×104個BMMSCs細胞與牙本質(zhì)片共培養(yǎng)于24孔培養(yǎng)板中,培養(yǎng)2 w后固定、脫礦、包埋、連續(xù)切片,通過蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）,Masson三色法和免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry, IHC）染色檢測細胞在牙片周圍生長狀況、組織形態(tài)學(xué)變化及牙本質(zhì)涎蛋白（dentin sialoprotein, DSP）的表達情況。體內(nèi)實驗:收集5×106個BMMSCs細胞與牙本質(zhì)片復(fù)合后移植到大鼠腎被膜下,6 w后取材、固定、脫礦、包埋、連續(xù)切片,通過HE、Masson三色法和IHC染色檢測細胞在牙片周圍形態(tài)變化和DSP的表達情況。另... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

全骨髓貼壁法培養(yǎng)的BMMSCs形態(tài)學(xué)觀察A：剛貼壁的細胞大部分呈圓形或者短棒狀，透亮，周圍有光暈（×40）；B：部

圖 1.1 全骨髓貼壁法培養(yǎng)的 BMMSCs 形態(tài)學(xué)觀察A：剛貼壁的細胞大部分呈圓形或者短棒狀，透亮，周圍有分細胞呈梭形，發(fā)出突起（×100）；C：8 ~ 10 d 左右細胞生傳代后細胞逐漸伸展，有時可見分裂期的多核仁細胞（×1形態(tài)較均一的細胞（×40）；F：10 代以上的細胞胞體增大，老現(xiàn)象（×100）；

圖 1.3 BMMSCs 的增殖狀況及周期分布A：BMMSCs 在接種后第 3 天左右進入對數(shù)生長期，第 7 天左右進入平臺期，整體生長曲線呈“S”形；B：BMMSCs的G0/G1期、S期及G2/M 期比例分別為 72.71%、20.90%及 6.39%。圖 1.4 BMMSCs 的成骨及成脂分化A：經(jīng)礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后 BMMSCs 的成骨能力明顯增強；B：經(jīng)成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后 BMMSCs 內(nèi)有油紅 O 染色陽性的脂滴形成（×100）；C：未經(jīng)成脂誘導(dǎo)的BMMSCs 無脂滴形成（×100）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]牙本質(zhì)非膠原蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖活性和礦化能力的影響[J]. 劉晨晨,雷港,俞艷,王賽楠,閆明,于金華,張光東.  牙體牙髓牙周病學(xué)雜志. 2010(05)
[2]人牙髓細胞在離體牙髓腔內(nèi)向成牙本質(zhì)細胞樣細胞分化的研究[J]. 朱軼萍,張光東,吳友農(nóng).  口腔醫(yī)學(xué). 2008(01)



本文編號：3366953