目的探討放線共生放線桿菌（actinobacillus actinomycetemcom itans,A.a）培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞分化以及細(xì)胞間隙連接通訊的影響。方法在A.a培養(yǎng)上清中體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞,中性紅檢測成骨細(xì)胞活性,RT-PCR檢測成骨細(xì)胞分化標(biāo)記,免疫組化觀察Ⅰ型膠原蛋白表達(dá),利用劃痕標(biāo)記熒光染料示蹤（SLDT）法與Westernblot檢測Connexin43的表達(dá),研究成骨細(xì)胞間隙連接通訊的變化。結(jié)果20%以下濃度的A.a培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞無明顯致死性。RT-PCR結(jié)果顯示A.a培養(yǎng)上清中成骨細(xì)胞分化標(biāo)記的表達(dá)降低。免疫組化結(jié)果顯示A.a培養(yǎng)上清中成骨細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)降低。SLDT法結(jié)果顯示A.a培養(yǎng)上清中成骨細(xì)胞熒光染料擴(kuò)散低于對照組。Western blot檢測結(jié)果顯示A.a培養(yǎng)上清中成骨細(xì)胞Connexin43表達(dá)降低。結(jié)論A.a培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞分化及細(xì)胞間隙連接通訊有抑制作用。 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2010,32(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同濃度A.a培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞分化的影響

A:alpha-MEM,24 h;B:5%A.a培養(yǎng)上清,24 h圖3　SLDT法檢測成骨細(xì)胞GJIC變化LY熒光擴(kuò)散距離　(×100)　　圖4顯示5株不同菌株A.a培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞MC3T3-E1的GJIC抑制結(jié)果。所有菌株培養(yǎng)上清與對照組相比對成骨細(xì)胞GJIC有50% ~70%的抑制作用,所有菌株培養(yǎng)液對成骨細(xì)胞GJIC抑制作用沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0·05)。因此決定使用A.a標(biāo)準(zhǔn)株ATCC43717進(jìn)行實驗。圖4　不同A.a菌株培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞MC3T3-E1GJIC的影響2. 3. 2　不同濃度A.a培養(yǎng)上清對GJIC的影響　　A.a培養(yǎng)上清濃度越大,對GJIC的抑制作用越明顯(圖5)。5%濃度的A.a培養(yǎng)上清與對照組相比對成骨細(xì)胞GJIC有60%以上的抑制作用。a:P<0. 01,與A.a培養(yǎng)上清濃度0%比較圖5　A.a培養(yǎng)上清濃度對GJIC的影響2. 3. 3　隨時間推移A. a培養(yǎng)上清對GJIC的影響　　隨時間推移A.a培養(yǎng)上清對GJIC的作用結(jié)果見圖6。加入A. a培養(yǎng)上清30 min后開始出現(xiàn)GJIC的抑制作用,培養(yǎng)24 h檢測A. a培養(yǎng)上清對GJIC的抑制作用最明顯。24、48 h更換不含A. a培養(yǎng)上清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)成骨細(xì)胞,GJIC在72 h后恢復(fù)到原有水平。2. 4　A.a培養(yǎng)上清對Connexin43表達(dá)的影響　　圖7顯示5%A. a培養(yǎng)上清培養(yǎng)成骨細(xì)胞24、72 h, Cx43蛋白條帶的3種亞型,相對分子質(zhì)量大小為43×103、40×103和39×103

圖4　不同A.a菌株培養(yǎng)上清對成骨細(xì)胞MC3T3-E1GJIC的影響2. 3. 2　不同濃度A.a培養(yǎng)上清對GJIC的影響　　A.a培養(yǎng)上清濃度越大,對GJIC的抑制作用越明顯(圖5)。5%濃度的A.a培養(yǎng)上清與對照組相比對成骨細(xì)胞GJIC有60%以上的抑制作用。a:P<0. 01,與A.a培養(yǎng)上清濃度0%比較圖5　A.a培養(yǎng)上清濃度對GJIC的影響2. 3. 3　隨時間推移A. a培養(yǎng)上清對GJIC的影響　　隨時間推移A.a培養(yǎng)上清對GJIC的作用結(jié)果見圖6。加入A. a培養(yǎng)上清30 min后開始出現(xiàn)GJIC的抑制作用,培養(yǎng)24 h檢測A. a培養(yǎng)上清對GJIC的抑制作用最明顯。24、48 h更換不含A. a培養(yǎng)上清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)成骨細(xì)胞,GJIC在72 h后恢復(fù)到原有水平。2. 4　A.a培養(yǎng)上清對Connexin43表達(dá)的影響　　圖7顯示5%A. a培養(yǎng)上清培養(yǎng)成骨細(xì)胞24、72 h, Cx43蛋白條帶的3種亞型,相對分子質(zhì)量大小為43×103、40×103和39×103,分別代表磷酸化P2帶,磷酸化P1帶和非磷酸化NP帶。隨A.a培養(yǎng)上清培養(yǎng)時間推移

【參考文獻(xiàn)】：
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