目的:探索mi R-124對人牙周膜干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）成骨分化能力的影響及調(diào)控機(jī)制。方法:分離、純化培養(yǎng)人PDLSCs,檢測牙PDLSCs成骨誘導(dǎo)前后mi R-124和Osterix（OSX）的表達(dá);轉(zhuǎn)染mi R-124沉默（inhibitor）及過表達(dá)模擬物（mimics）;實時定量PCR（q PCR）檢測mi R-124和OSXm RNA水平的表達(dá);Western blot檢測OSX蛋白水平的變化,茜素紅染色分析PDLSCs成骨分化能力的變化;生物信息學(xué)手段分析mi R-124的靶基因,并通過雙熒光素酶報告實驗進(jìn)行驗證;共轉(zhuǎn)染mi R-124 inhibitor和OSX小干擾RNA（siRNA）,檢測共轉(zhuǎn)染后對PDLSCs成骨分化能力及OSX表達(dá)的影響。結(jié)果:成骨分化誘導(dǎo)后PDLSCs中mi R-124的表達(dá)明顯下調(diào),而OSX的表達(dá)則顯著升高;過表達(dá)mi R-124可明顯抑制OSX的表達(dá)和PDLSCs的成骨分化能力,抑制mi R-124的表達(dá),則結(jié)果相反;生物信息學(xué)手段分析OSX為mi R-124的潛在靶基因,雙熒... 

【文章來源】：中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2020,18(02)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

牙周膜干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)后mi R-124和成骨相關(guān)基因的表達(dá)

mi R-124對PDLSCs的成骨分化能力的影響

miR-124的靶基因為OSX生物信息學(xué)分析預(yù)測發(fā)現(xiàn)OSX為miR-124的潛在靶基因，圖2結(jié)果顯示miR-124 mimics組中OSX的表達(dá)明顯低于對照組，說明OSX可被miR-124負(fù)向調(diào)控。采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實OSX是miR-124的靶基因，檢測結(jié)果顯示，OSX-WT+miR-124組的熒光比值低于OSX-WT+miR-NC組(圖3)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。OSX-MUT+miR-124組和OSX-MUT+miR-NC組的熒光比值分別為0.952±0.047和1.0±0.073，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。表明miR-124可與OSX基因3’-UTR位點結(jié)合，miR-124與OSX存在直接負(fù)向調(diào)控關(guān)系。2.4 沉默OSX能逆轉(zhuǎn)miR-124 inhibitor對PDLSCs成骨向分化的促進(jìn)作用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]成骨特異轉(zhuǎn)錄因子Runx2在去勢大鼠正畸牙移動牙周組織中的表達(dá)[J]. 代慶剛,江凌勇,張鵬,吳玉瓊,馬旭輝,房兵.  中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2014(01)
[2]牙周病與糖尿病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 劉玉鳳,柯杰,趙桂芝.  中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2010(03)
[3]組織工程牙再生發(fā)育的研究進(jìn)展[J]. 趙征,劉洪臣.  中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2009(04)



本文編號：3352210