目的：在三維培養(yǎng)條件下,觀察胚胎鼠唾液腺上皮細(xì)胞分枝樣結(jié)構(gòu)的形成過(guò)程并研究其自組裝機(jī)制,探討唾液腺再生的方法。方法：（1）獲取15天胚胎SD大鼠下頜下腺行組織塊法培養(yǎng)。分離、純化獲得原代下頜下腺上皮細(xì)胞并傳代培養(yǎng)；對(duì)第2代下頜下腺上皮細(xì)胞行CK19, Vimentin, Laminin免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定及透射電鏡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察。（2）將第2代細(xì)胞接種至Matrigel上,進(jìn)行三維培養(yǎng)。共分2組：第一組：實(shí)驗(yàn)組,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)加抗E-cadherin及抗β-catenin。第二組：對(duì)照組,單純基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)。在培養(yǎng)第1,3,6,9天內(nèi)倒置顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察2組三維培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。取培養(yǎng)第6,12天的組織固定,連續(xù)切片后行PAS染色,淀粉酶免疫組化染色,CK19免疫熒光等檢測(cè)。E-cadherin,β-catenin的免疫細(xì)胞化學(xué)及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè),圖像采集分析MOD值,統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。結(jié)果：（1）低濃度血清培養(yǎng)可以獲得純化較高的、CK19、Laminin陽(yáng)性表達(dá)的下頜下腺上皮細(xì)胞。第2代下頜下腺上皮細(xì)胞在透射電鏡下見(jiàn)細(xì)胞核大,胞漿內(nèi)含大量酶原顆粒及豐富的線粒體,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

胚胎鼠下領(lǐng)下腺上皮細(xì)胞形態(tài)(x200)

隨機(jī)取第2代胚胎鼠下領(lǐng)下腺上皮細(xì)胞爬片行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，檢測(cè)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志CK19、V而entin、Laminin，CK19檢測(cè)鏡下可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕色強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，V而entin檢測(cè)細(xì)胞未見(jiàn)棕黃色顆粒表達(dá)，大部分細(xì)胞Laminin胞漿呈棕色表達(dá)。見(jiàn)圖3。

6天觀察細(xì)胞呈不規(guī)則片狀生長(zhǎng)，有分枝形成，細(xì)胞形成分枝較短，排列較為粗亂，不規(guī)則。12天細(xì)胞生長(zhǎng)更為密集，細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)不明顯，鏡下未發(fā)現(xiàn)有明顯的腺泡樣三維結(jié)構(gòu)形成。見(jiàn)圖5。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腺體組織損傷后體外分離下頜下腺干/祖細(xì)胞后的克隆化培養(yǎng)[J]. 蔣練,黃桂林,姜群,王春宇,潘光華,張霓霓,王君勝.  中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(49)
[2]損傷下頜下腺模型中涎腺干/祖細(xì)胞分離及特征的初步研究[J]. 黃桂林,姜群,王天果,潘光華,王春宇,張霓霓.  實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2009(02)



本文編號(hào)：3323710