目的:本研究將比格犬的DPSCs和PDLSCs進行體外分離、培養(yǎng)、鑒定,比較分析兩種干細胞的不同特性,并分別將cDPSCs和cPDLSCs復(fù)合PGA支架并接種在TDM表面,異位移植于比格犬的腎囊膜下,觀察并比較兩者在TDM周圍牙周支持組織樣結(jié)構(gòu)的形成情況。方法:1.采用酶消化法分離培養(yǎng)比格犬的DPSCs和PDLSCs,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài);克隆形成率和CCK 8檢測法評價增殖能力;通過細胞免疫組化鑒定細胞來源;流式細胞術(shù)檢測兩種細胞表面標(biāo)志物;成骨、成脂及成軟骨誘導(dǎo)檢測兩種細胞多向分化的能力。2.分別將cDPSCs和cPDLSCs復(fù)合PGA支架并接種在TDM表面,體外靜態(tài)力學(xué)刺激培養(yǎng)2周,倒置顯微鏡下觀察細胞與支架的生物相容性。3.用慢病毒介導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)染cDPSCs,倒置熒光顯微鏡下觀察cDPSCs形態(tài)、生長情況及GFP熒光的表達強度,并將其復(fù)合PGA支架同方法2。4.將體外力學(xué)刺激培養(yǎng)2周的cDPSCs-PGA-TDM、cPDLSCs-PGA-TDM、PGA-TDM（空白組）及cDPSCs-GFP-PGA-TDM,異位移植于比格犬的腎囊膜下。術(shù)后8周取材,常規(guī)的固定、脫鈣、包埋... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

cDPSCs和cPDLSCs的形態(tài)學(xué)觀察A:cDPSCs原代培養(yǎng)3d（×40）；B:cPDLSCs原代培養(yǎng)5d（×40）；C:cDPSCs原代培養(yǎng)12d（×40）；D:cPDLSCs原代培養(yǎng)15d（×40）；E:P1代cDPSCs生長情況

福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文DPSCs、cPDLSCs 增殖能力的檢測生長曲線的測定cDPSCs、cPDLSCs 的增殖曲線，符合細胞對數(shù)生長曲線，呈現(xiàn)明顯的“S包括：潛伏期、對數(shù)生長期、平臺期。接種 1-2 天，生長緩慢，處于潛伏期-6 天，細胞增殖較旺盛，數(shù)量大幅度增加，處于對數(shù)生長期，第 7 天進入，開始出現(xiàn)緩慢下降。從第二天開始，cDPSCs 的增殖能力明顯強于 cPDLSC具有統(tǒng)計學(xué)意義（n=3，P<0.05，圖 1-2）。

18圖 1-3 cDPSCs 和 cPDLSCs 的克隆形成能力的比較A 和 B: 結(jié)晶紫染色顯示 cDPSCs 和 cPDLSCs 形成的單克隆集落（×40）； C 和 D:cDPSCs 和 cPDLSCs 全部克隆集落結(jié)晶紫染色大體觀察； F:cDPSCs 和 cPDLSCs 的克隆形成率的比較（P<0.05）Figure 1-3 Comparison of cloning ability of cDPSCs and cPDLSCsAand B: Crystal Violet Stain showing monoclonal colonies formed by cDPSCs andcPDLSCs (×40); C and D: Gross observations of clone colonies of cDPSCs and cPDLSCsstained by crystal violet; F: Comparison of colony formation rates of cDPSCs andcPDLSCs (P) <0.05)


本文編號：3320779