本文關(guān)鍵詞：輔酶Q10對糖尿病大鼠牙周炎牙齦組織MMP-9和血清OPG、RANKL的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,在此基礎(chǔ)上用輔酶Q10進(jìn)行干預(yù),評價Ⅱ型糖尿病大鼠的牙周病損狀態(tài)的差異和變化,通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測大鼠牙周組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinases,MMP-9)的表達(dá)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測大鼠血清中骨保護(hù)素(osteoprotegerin,OPG)、核因子-κB受體活化因子配體(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的水平的改變,探討輔酶Q10在阻斷或延緩糖尿病大鼠牙周炎發(fā)病進(jìn)程中的意義,為輔酶Q10臨床輔助治療或預(yù)防糖尿病牙周炎提供理論參考。方法:選取120只健康雄性Wistar大鼠,體重約180g左右,隨機(jī)分6組,20只為一組,分別為空白組(O組)、牙周炎組(P組)、糖尿病組(DM組)、糖尿病牙周炎組(DMP組)、輔酶Q10糖尿病組(QDM組)、輔酶Q10糖尿病牙周炎組(QDMP組)。動物分籠飼養(yǎng),自由攝食、水。所有大鼠稱重,監(jiān)測尾靜脈血糖。1建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型DM、DMP、QDM、QDMP組大鼠飼以高脂高糖飼料4周,再按大鼠體重40mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin STZ),建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型[1]。注射后1-2周檢測血糖,空腹血糖達(dá)到16.65mmol/L者定為糖尿病大鼠。2灌注輔酶Q10溶液QDM、QDMP組大鼠每日將10%水溶性輔酶Q10按9mg/kg灌胃,其余組大鼠每日同劑量生理鹽水灌胃。灌注輔酶Q10約5周,開始準(zhǔn)備建立牙周炎,糖尿病大鼠牙周炎模型,QDM、QDMP組大鼠輔酶Q10灌注至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。3建立大鼠牙周炎模型對P組、DMP組、QDMP組通過絲線結(jié)扎+飲自身糞便水法復(fù)制大鼠牙周炎模型。在牙周炎造模過程中,觀察六組大鼠整個實(shí)驗(yàn)過程活動狀態(tài)、飲食、尿量等情況的變化,并每兩日觀察大鼠的牙齦組織的顏色,腫脹情況,有無探診出血等。根據(jù)牙周指標(biāo)和X線片對比P組、DMP組、QDMP組大鼠在牙周炎造模過程中牙周破壞的程度,并分別于給藥前(即糖尿病大鼠造模成功后)及給藥后5周、9周(即大鼠牙周結(jié)扎第4周)、11周(即大鼠牙周結(jié)扎第6周)、13周(即大鼠牙周結(jié)扎第8周)末進(jìn)行牙周袋平均深度(Mean depth of periodontal pocket)以及牙槽骨垂直骨吸收總量(Total attachment loss)檢測,而后對其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。分別于糖尿病大鼠造模成功后、給藥后5周、大鼠牙周結(jié)扎第4周、6周、8周末各組大鼠在指標(biāo)觀測及檢測結(jié)束后,動物給予過量麻醉,迅速開胸取血2-3ml,離心,3500轉(zhuǎn)/分,10分鐘,取血清。立即分離大鼠下頜第一磨牙的牙齦組織,固定于40g/L多聚甲醛液中。(1)進(jìn)行牙齦組織脫水,石蠟包埋,制切片,免疫組化染色,光鏡下觀察,對牙周組織MMP-9的表達(dá)進(jìn)行測定。(2)ELISA法檢測大鼠血清OPG、RANKL的水平。結(jié)果:1建立Ⅱ型糖尿病動物模型DM、DMP、QDM、QDMP組大鼠空腹血糖大于16.65mmol/L,達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。各組大鼠血糖水平的對比:糖尿病造模后分別記錄6組大鼠糖尿病造模后,輔酶Q10給藥5周及結(jié)扎后4、6、8周大鼠血糖值。糖尿病組(DM組)、糖尿病牙周炎組(DMP組)、輔酶Q10糖尿病組(QDM組)、輔酶Q10糖尿病牙周炎組(QDMP組)血糖分別與O組(空白對照組)、P組(牙周炎組)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2牙周結(jié)扎后對各組大鼠進(jìn)行牙周狀況的評價O、DM、QDM組在實(shí)驗(yàn)中牙齦組織未出現(xiàn)明顯牙齦紅腫和探針出血,無牙周袋形成和牙槽骨吸收。P、DMP、QDMP組牙周結(jié)扎后:三組比較結(jié)扎后DMP組最先出現(xiàn)下頜第一磨牙牙齦紅腫且探診極易出血,并于結(jié)扎后第2周末DMP組大鼠陸續(xù)開始出現(xiàn)牙周袋,較QDMP組和P組提前,且牙周袋的深度較QDMP組增加快。糖尿病造模后和輔Q10給藥5周末,各組大鼠之間平均牙周探診深度和牙槽骨垂直吸收總量對比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)扎后4、6、8周末大鼠下頜第一磨牙牙周袋平均深度和牙槽骨垂直吸收總量:DMP組QDMP組P組。結(jié)扎后4周,DMP組、QDMP組分別于O、DM、QDM組測量結(jié)果對比有差異(P0.05),其余組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。P組雖然探診深度和牙槽骨垂直吸收總量雖大于O、DM、QDM組,但P0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)扎后6周,P組、DMP組、QDMP組分別與O、DM、QDM組比較差異顯著(P0.01),P組與DMP組測量結(jié)果對比有差異(P0.05)。結(jié)扎后8周,P組、DMP組、QDMP組分別于O、DM、QDM組對比差異顯著(P0.01),P組與DMP組,DMP組與QDMP組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)3大鼠HE染色組織形態(tài)的觀察O組、DM組、QDM組大鼠牙齦組織極少量炎細(xì)胞浸潤,膠原束排列有序。結(jié)扎后8周,P組大鼠牙齦上皮增生,固有層可見中度炎細(xì)胞浸潤,成纖維細(xì)胞增生,膠原纖維束排列紊亂。DMP組大鼠牙齦上皮明顯增生,固有層可見大量炎細(xì)胞浸潤,成纖維細(xì)胞增生及毛細(xì)血管增生,大部分膠原纖維斷裂崩解。QDMP組大鼠牙齦上皮增生,固有層可見炎細(xì)胞浸潤,成纖維細(xì)胞增生及毛細(xì)血管增生,部分膠原纖維裂解。4大鼠牙齦組織MMP-9的表達(dá)O組大鼠在整個實(shí)驗(yàn)過程中牙齦組織表達(dá)MMP-9無明顯改變;糖尿病造模后和輔酶Q10給藥5周末,DM、DMP、QDM、QDMP組高于O、P組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)扎后4,6,8周末,DMP、QDMP組分別與O、P、DM、QDM組相比有差異(P0.05),DMP組與P組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),DMP組與QDMP組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5大鼠血清中OPG、RANKL的水平和RANKL/OPG的比值糖尿病造模后5個時間點(diǎn)檢測OPG、RANKL在血清中表達(dá)DM、DMP、QDM、QDMP組與P、O組相比有顯著差異(P0.01)。牙周炎結(jié)扎后OPG、RANKL在M組血清中表達(dá)增強(qiáng),高于O組,但M組與O組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。隨給藥時間延長,結(jié)扎后6,8周時,DMP、QDMP組OPG、RANKL在血清中表達(dá)差異顯著(P0.01)。RANKL/OPG的比值在糖尿病大鼠造模成功后、給藥后5周、牙周結(jié)扎后4周、牙周結(jié)扎后6周、牙周結(jié)扎后8周時,O組、P組分別與DM組、DMP組、QDM組、QDMP組比較,差異顯著(P0.01)。且在牙周結(jié)扎后8周末DM組與QDM組,DMP組與QDMP組比較均差異顯著(P0.01)。結(jié)論:1本實(shí)驗(yàn)通過對大鼠腹腔注射低劑量STZ成功建立了Ⅱ型糖尿病大鼠模型。利用局部絲線結(jié)扎+飲自身糞便水法成功建立了糖尿病大鼠的牙周炎模型。2本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)糖尿病組大鼠的牙周炎發(fā)病時間提前,牙周破壞程度加重,再次證實(shí)糖尿病對牙周炎的負(fù)向調(diào)節(jié)作用。3實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)一定劑量的輔酶Q10的應(yīng)用可以減輕糖尿病牙周炎大鼠牙周組織的病理性損傷程度。4輔酶Q10對糖尿病大鼠牙周炎的延緩作用有可能是通過大鼠牙周局部組織中MMP-9、血清中OPG、RANKL的表達(dá)差異來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 牙周炎 輔酶Q10 骨保護(hù)素 核因子-κB受體活化因子配體RANKL 基質(zhì)金屬蛋白酶-9 牙槽骨吸收
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R587.1;R781.4
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-32
• 附表32-36
• 討論36-43
• 結(jié)論43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 綜述 輔酶 Q10與牙周炎、糖尿病牙周炎48-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 致謝56-57
• 個人簡歷57

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本文編號：328839