背景及目的:電離輻射與紫杉醇協(xié)同作用,可以誘導體外培養(yǎng)的人口腔上皮癌KB細胞產(chǎn)生G2/M期阻滯,形成多核細胞,并最終造成死亡。先前通過基因芯片篩選研究發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過電離輻射和/或紫杉醇作用后,有10條與細胞分裂有關的基因存在差異表達。本研究旨在通過Real-time PCR和Western Blot定量分析其中兩條基因SPATA5L1、Cyclin B2的表達變化來揭示G2/M期阻滯及多核細胞形成的分子機制。方法:不同劑量60Coγ射線照射聯(lián)合不同濃度紫杉醇作用于KB細胞,用以下實驗觀察受照細胞的變化:（1）倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學的變化,細胞克隆形成實驗檢測細胞增殖抑制效應;（2）利用Real-time PCR技術檢測SPATA5L1基因表達隨照射劑量和藥物濃度變化的情況;（3）Western Blot實驗檢測電離輻射聯(lián)合紫杉醇對KB細胞內SPATA5L1、Cyclin B2蛋白含量的影響。結果:（1）電離輻射和紫杉醇協(xié)同作用能顯著抑制KB細胞的生長增殖,且這種協(xié)同效應是照射劑量和藥物濃度依賴性的;（2）KB細胞經(jīng)電離輻射、紫杉醇或兩者聯(lián)合作用后,形成大量多核細胞,并最終死亡;（3）Re... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組細胞形態(tài)改變（箭頭所指為多核細胞）

10圖1.2 不同濃度紫杉醇及不同劑量射線作用后KB細胞存活曲線四、討論細胞克隆形成實驗是評價單細胞存活和增殖的一個良好指標，也是放射生物學中常用和可靠的實驗方法[15]，通常設定單個細胞繁殖到 50 個細胞以上形成的細胞團稱為一個克隆，表示其具有無限增值能力，可以稱之為存活細胞。實驗發(fā)現(xiàn)，KB 細胞受到不同劑量的 γ 射線照射聯(lián)合不同濃度紫杉醇作用后，細胞克隆形成顯著減少，細胞的生長受到了明顯的抑制，并且與照射劑量和藥物濃度相關，兩者存在協(xié)同作用，表明紫杉醇具有明顯的放射增敏作用。細胞受到照射、藥物作用或兩者聯(lián)合作用后，形態(tài)上有較明顯的變化，出現(xiàn)多核細胞

圖 2.1 RT-PCR 擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結果異表達基因的驗證ime PCR 熔解曲線分析顯示 GAPDH、SPATA5L1 均為單峰，表異性擴增，擴增結果可信，見圖 2.2。Dissociation Curve24680246

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3278756