目的建立動物模型,實時熒光定量PCR、Western免疫印跡分析方法,檢測P13K、AKt在正畸牙移動牙周組織改建過程中的表達及變化,探討正畸力作用下兔牙周組織中P13K／AKt信號通路在牙周組織改建過程中的作用。方法1、建立動物模型選用24只日本大耳白兔（體重2.0±0.2kg）,建立正畸牙移動的動物模型,按照3天、5天、7天、14天隨機分組,每組6只。上頜右側(cè)戴矯治器為實驗組,分別在切牙與磨牙的近頸端纏繞雙股結(jié)扎絲,然后在切牙與磨牙間放置鎳鈦螺簧,力值80g,使磨牙近中移動。上頜左側(cè)未戴矯治器為對照組。實驗動物分別于3、5、7、14天處死。2、RQ-PCR按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒使用說明操作,選用oligndT作引物合成第一鏈cDNA,RQ-PCR檢測正畸力作用下P13K、AKt在牙周組織中的表達及變化。所有的產(chǎn)物,在ABI Prism 7500HT序列檢測系統(tǒng)中運行。3次獨立樣本經(jīng)過3次獨立實驗后得到的數(shù)據(jù)用公式RQ=2-ΔΔCt進行分析。3、Western免疫印跡分析吸取上清,棄沉淀,考馬斯亮藍法測定樣品中蛋白濃度。上清用8%SDS-PAGE分離然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,經(jīng)2h50V的轉(zhuǎn)印... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖I}PI3KmR1}IA擴增曲線

RQ一PcR檢測PI3KmRNA在牙周組織中的表達

一O〕‘6065了07氣勺飛二二90!‘叮pe.atur咤(!-圖5，AKtmRNA溶解曲線Figs，DissociationcurveofAKtmRNA

【參考文獻】：
期刊論文
[1]正畸力作用下兔牙周組織中雷帕霉素靶蛋白和核糖體蛋白S6激酶的表達[J]. 劉奕,郭亞峰.  華西口腔醫(yī)學雜志. 2008(06)
[2]兔牙移動過程中牙周組織核糖體蛋白S6激酶mRNA的表達[J]. 郭亞峰,劉奕.  口腔醫(yī)學. 2008(09)
[3]矯治力對兔牙周組織中雷帕霉素靶蛋白和核糖體S6蛋白激酶活性的影響[J]. 劉奕,畢瑋瑋.  中國醫(yī)科大學學報. 2008(03)
[4]哺乳動物的雷帕霉素靶蛋白及其底物在口腔鱗狀細胞癌中的表達[J]. 劉奕,楊鳴良,張揚,于秉治.  華西口腔醫(yī)學雜志. 2004(04)
[5]mTOR/eIF-4EBP1信號通路在粘液表皮樣癌發(fā)生中的作用[J]. 劉奕,張揚,楊明良,閻秀林,陳亞非,于秉治.  臨床口腔醫(yī)學雜志. 2004(06)
[6]mTOR/P70S6激酶信號通路在腮腺腺癌發(fā)生中的作用[J]. 劉奕,包揚,趙震錦,張揚,方長青,李建華,于秉治.  中國醫(yī)科大學學報. 2004(03)
[7]mTOR及其底物在HeLa細胞的細胞周期不同時相中的表達[J]. 劉奕,Sujuta HIDAYAT,米澤一仁,于秉治.  中國生物化學與分子生物學報. 2004(03)
[8]細胞生長的中心調(diào)控因子——納巴霉素靶[J]. 趙詠梅,劉奕,于秉治.  生命的化學. 2002(06)



本文編號：3268448